如何设计miRNA正向引物 - 干细胞与基因技术交流专区干细胞之家

干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 › 干细胞之家论坛 › 干细胞实验室技术交流 › 干细胞与基因技术交流专区 › 如何设计miRNA正向引物



免疫细胞治疗专区	欢迎关注干细胞微信公众号

返回列表

查看: 17761\|回复: 3	go 如何设计miRNA正向引物 [复制链接]

lilyinsun1

新手上路

Rank: 1

积分: 1
威望: 1
包包: 8

楼主

发表于 2012-4-10 14:26 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

我想咨询一下您如何设计miRNA正向引物各位前辈不吝指教！

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 1	+ 5	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 1 包包 + 5 查看全部评分

回复引用

Rank: 3 Rank: 3

积分: 563
威望: 563
包包: 1367

优秀会员金话筒

沙发

发表于 2012-5-2 00:15 |只看该作者

正向引物长约20-25个核苷酸,在3'断有6-10个核苷酸与相应的miRNA互补,剩余的核苷酸的Tm值高于65度.

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 5	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5 包包 + 10 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

zhlqlkpc

新手上路

Rank: 1

积分: 29
威望: 29
包包: 277

藤椅

发表于 2012-7-11 16:32 |只看该作者

首先要看你的逆转录的策略，有些是在逆转录过程中加上很长一段尾巴，这样，在PCR时，上游是成熟miRNA的部分序列，下游是根据共用的"尾巴“的最后一段。如果逆转录不是这样做，PCR引物设计策略也要相应修改的，如果用茎环结构设计引物，不是在3‘端加尾，那上游引物取成熟序列前14-15个碱基。我的实验步骤，在这14个碱基前加了GGG（或者GGGG）这样上游引物碱基数目就达到17-18个了。