单泛素化的概念

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最近看了一篇文献，文中提到了单泛素，我一时没有理解，想请问站内朋友以下2个问题：% o5 |8 |4 ]; x% U
1、单泛素化的概念, c2 h0 t) }9 M0 H! H
2、单泛素化的判定，比如通过哪些实验可以证明是只发生了单泛素化
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泛素是一在进化上非常保守的蛋白质，能够共价连接于另一蛋白质分子上，即称为该蛋白被泛素化。在泛素激活酶1（E1）、泛素偶联酶2（E2）和泛素连接酶3（E3）的作用下，在泛素C 末端甘氨酸（Gly-76）和目的蛋白赖氨酸的ε-氨基之间形成共价连接。E3 连接酶能够识别底物，决定了泛素化的特异性。通常，单个的泛素分子连接到目的蛋白的一个或几个赖氨酸残基上，称为单泛素化或多个单泛素化，而单个的泛素分子重复串联在一个赖氨酸残基上，称为多泛素化。蛋白质泛素化修饰的类型决定了蛋白质的命运。一般单泛素化的蛋白质与质膜蛋白质的内化和组蛋白的调节等有关，而由四个以上泛素分子串联形成的多泛素化是蛋白酶体降解的识别信号。泛素化修饰是其被分选进入多胞体内部膜泡的信号，当泛素化的信号被内体膜的分选机制所识别之后，蛋白酶体会使泛素分子从被修饰的受体分子上掉下来再利用，而无泛素修饰的受体则被分选到多胞体内部的膜泡，以利于溶酶体的降解。如果要证明只发生了单泛素化，一种方法可以通过采用lactacystin 特异地抑制蛋白酶体的活性，观察泛素化的某目的蛋白是否也能够进行正常的分选，但其从多胞体外膜分选进入内部膜泡的效率显著下降。如果有发生了这种实验现象，可以从一个方面说明某蛋白发生了单泛素化。( i5 F+ ]* u! t* v1 `0 q( O# s
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