Accutase对细胞的伤害

zkfootball

大家好，我现在从96孔板里（1个孔）把细胞转移到12孔板里。先用30ul accutase消化2分钟，然后加培液，吹打一下，直接吸到12孔板里。
1 L% l& }0 P5 \尽管已经稀释了将近30倍，不知道accutase残留在12孔板里，会不会对细胞有伤害？: d! r; N6 x# d" _
我这个细胞贴壁比较慢，可能需要孵育2天，不知道accutase会不会影响细胞？

Jonathan

不知道谁教你用培养基来stop accutase的还是你自己想出来的办法。accutase不能像trpsin一样可以用media来中和的。我是先用F12稀释大概5-6倍然后把细胞离心下来，去掉上清。再加培养基。然后分孔。

shaozi402

我们实验室养的H1，用的acctase消化，一直都是用培养基来终止消化的。

shaozi402

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9 O7 H( c/ ~8 }- _4 O) P为什么不离心呢

Soso

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以前做过贴壁细胞传代，酶终止用的也是培养基，细胞比较坚强稀释倍数也比较大，所以结果还好。另外在网上查到Accutase比较温和，对细胞伤害极低，消化结束不需另做清洗。当然，不知道厂家是否和您的一致，仅供参考

ss安雅熙

用胶原酶消化以后不需要终止 但是终止也不影响 一般Accutase用于干细胞的传代消化 时间最长可到30分钟 细胞状态还保存不错

bubble_w

回复 Jonathan 的帖子7 A. s$ |) H- v" Z3 |) J/ x

9 ]0 w  G4 m, P0 u% u请问用accutase消化hiPS，消化到什么程度终止？

Jonathan

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0 U1 G" G1 d0 U9 @0 F) m
* s& w4 Q% a+ W2 o9 y6 V. d$ V3-5分钟，可以看见少部分掉下来就可以。然后用枪吹一下，就全部下来了

yeungfan

应该有F12终止消化，然后把细胞吸出来先离心，然后弃上清，再用干细胞培养基重悬细胞，然后种细胞。ACCUTASE本身算是比较温和的消化酶了，唯一的问题是，你把1个96孔的细胞移到1个12孔里，细胞会不会太少啊？一般不会这样做的