KSR+2i培养H1出现问题

scottist

请教各位前辈，我使用20% KSR+CHIR+IWR-1（参考文献：Nat Commun. 2013;4:2403. doi: 10.1038/ncomms3403.Modulation of β-catenin function maintains mouse epiblast stem cell and human embryonic stem cell self-renewal.Kim H1, Wu J, Ye S, Tai CI, Zhou X, Yan H, Li P, Pera M, Ying QL.全文链接：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23985566），但是加完以后细胞很快出现大量分化，不知是何原因？在使用2i培养液之前一直使用mTesR1培养。[img]

lp0030

回复 scottist 的帖子. m* e  h+ l' _

! n' U- \* e5 J/ F$ S& I! t这个方法似乎更适用与小鼠的Epiblast细胞，对于人的细胞还需要饲养层细胞才参与。

scottist

回复 lp0030 的帖子$ B: M( I% S. b8 i8 J" B  t
  n! O4 d7 j* n: R5 i- Y: X
谢谢。小鼠的应该是可以，但应其龙的文章中说hESC也是可以的，而且支持单细胞传代，但是我重复不出来。

lp0030

回复 scottist 的帖子5 h; [  M. q/ q
0 u9 V% `+ ]% a1 W& q
可能和细胞系有关。但总体来说还做不到人ES细胞的无feeder培养。

scottist

回复 lp0030 的帖子
9 _5 I4 {3 _% A) }% G+ U7 f
1 s. F  T( m4 F好的，谢谢！

fish_zbw1985

回复 scottist 的帖子
* @) R6 e- k7 J3 o  P) u% J$ @/ m3 H% E+ q1 I3 w9 j1 K$ J0 n
就我个人的看法，2i的体系对于小鼠EpiSCs合适不能说对人胚胎干细胞就一定适合。同细胞系的种类、状态、生长代数都有关系，H1细胞系本身就是人胚胎干细胞中相对难养的细胞系。Feeder-Free培养的话我觉得用mTeSR就挺不错的。

scottist

回复 fish_zbw1985 的帖子! v! J. x; @! S$ g+ H+ B/ ^3 |
  `: e" y" s$ F
明白，谢谢。