外源质粒是怎么整合到细胞基因组中去的？

echowdk

* c$ V+ S1 O" A; K$ Q. q( d, o8 O

- U/ [7 h6 s2 ~! i一直有个很弱的问题不明白。
% J' N! F+ C/ p# T. N我们在做稳定转染的时候，有的时候用没有线性化的质粒，这个环状质粒具体是怎么整合到基因组中去的呢？

naturalkillerce

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% I! J# g9 c1 L1 l粗略地讲，是通过同源重组，即质粒上的同源序列与基因组上的同源序列发生重组交换，质粒就整合上去的。

牛还可乐

wangyashuai

质粒与基因组同源部分相重合，就有一定的几率发生同源重组，与质粒是环状还是线性没关系。

guxi124

回复 wangyashuai 的帖子& |5 e6 B( K6 x/ H5 n, z& ]

! N. @5 e- o  c2 ]  Y6 t! d我以前做过毕赤酵母的转化，转化前质粒要线性化，说明书上说线性化后更有利于同源重组的发生。

yyshpy

重组互换，比较随机的

wangyashuai

从其他地方见到这些问题：“整合型质粒的线性化是提高了转化效率还是重组率？线性质粒进入细胞后，是重新环化进行同源重组，还是以线性结构进行同源重组？有论文说毕氏酵母染色体整合中的单交换是环状质粒的单交换，双交换是线性的交换”。还有就是其中说的单交换和双交换是什么意思？望大家解惑。

wangyashuai

我想单交换与双交换是针对同源重组的次数说的，环形质粒只用进行一次同源重组即可整合到宿主基因中，而线性DNA必须经过两次同源重组才能整合到宿主基因中。在论文中说单交换是插入，双交换是替换，但我有些想不通，线性DNA进行一个位点的同源重组会使基因组断裂，又如何插入到基因组中的？

echowdk

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  j: N7 f" F2 f
! z; s$ x0 Z* A3 o  U很遗传的问题啊，不知道遗传学那本教材上有没有。

bobo198666

我们做基因打靶的时候，转染前一定要质粒大切线性化，电转会比脂质体效率高很多