求神经干细胞帖壁培养Protocols

changbo529

小弟一直悬浮培养，最近想检测一下是否可以帖壁培养神经干细胞，这样可以方便做很多后序的检测，哪位大神前辈可以指导下仍维持神经干细胞干性的帖壁培养的方案以及诱导帖壁的包被物（小弟用PLL）和最长帖壁培养时间，谢谢

Life_Tech

回复 changbo529 的帖子% G+ f; P: }( H0 S
0 h. z, Y. Q/ A- ?' G1 @3 X
我们公司有个推荐的贴壁配方的方法可以供参考，也可以通过lifetechnologies.com/neuroprotocol/hnsc查看人神经干细胞培养的完整实验方案。
5 g- D( x+ H8 s0 Q) t1 Z1 s- _目前我们正在对实验方案进行汉化，稍后会分享给大家。; _7 n3 }, d: i3 g
9 z& r) g5 p8 j
神经干细胞的传代 (贴壁培养)) h( h2 c( t* s
1. 吸弃培养基，用不含Ca2+和Mg2+的D-PBS清洗细胞。2 H, ^$ y9 O$ l5 q) J9 _$ F4 K
2. 将1 mL的TrypLE™ Express或StemPro® Accutase® 加入培养器皿中。9 w/ o* Z4 [6 x
注：加入TrypLE™ Express或StemPro® Accutase® 30秒内，细胞单层即从培养皿中脱落。' M& z1 p9 a( q9 ?8 U/ Y
3. 轻轻吹打变松的细胞单层，使其形成单细胞悬液。加入4 mL培养基，终止其消化作用。加入TrypLE™ Express或StemPro® Accutase®后，切勿处理细胞超过3分钟。
0 m' L2 q$ C' P& @1 C0 t! u4. 细胞以1, 200 rpm离心4分钟。吸弃上清液。( ]5 @8 h3 Y3 ]  M
5. 将细胞重悬于StemPro® NSC SFM完全培养基中。
3 p5 a! T2 W5 Z5 w4 {6. 采用血球计数器计数细胞。6 J8 j# k8 m8 Q- h
7. 将以新鲜培养基稀释的细胞接种于CELLstart™ CTS™-或纤连蛋白包被的培养板中，密度为 1 × 104-1 × 105 个细胞/cm2，或者以1:4 的比例接种细胞。