融合蛋白降解问题

hndxws

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. E6 `2 M; T: ~" l6 Q我做了一个GFP的融合蛋白，表达量一直很低，转染后看荧光，相比对照转染来说，GFP的亮度比对照差很多。因此我怀疑我的融合蛋白降解了。然后我在转染后加了MG132，荧光就变强了，所以我认为我的融合蛋白是泛素化降解了。我看了一下我的目标蛋白氨基酸组成，发现只有一个Lys，然后我就又突变了这个Lys，但是我拿突变的再做转染看荧光时，发现并没有rescue到阳性对照那样的荧光亮度，只比原来的亮了一点，我觉得应该能rescue对照水平的，为什么没有呢/大家有什么建议

langziforever

回复 hndxws 的帖子" n2 b  t! P( C5 x' x9 ~
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你这个转染时的对照是什么？是只有GFP蛋白？如果是的话，那这个结果就是正常的，不能说明任何问题。因为单独的GFP亮度只能代表了你启动子的活性，而GFP蛋白的半衰期是很长的。可融合GFP蛋白的荧光比较暗一定程度上说明了存在降解，也有可能是大的融合蛋白合成收到了抑制，甚至是融合蛋白并不会都正确折叠发GFP荧光，所以，我觉得你这个结论下的太理想化了，可能需要你好好思考设计下你的实验，进一步对你这个结论验证一下！

hndxws

其实我的对照也是融合GFP的蛋白，而且这两个融合蛋白分别是我的目标蛋白的N端和C端与GFP的融合蛋白，对照和实验组用的都是CMV启动子。所以我觉得的确是泛素化降解了