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标题:
脐带贴块法间充质干细胞培养原代细胞生长少
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作者:
jifengtang
时间:
2015-12-29 20:49
标题:
脐带贴块法间充质干细胞培养原代细胞生长少
最近一直养脐带MSC,采用贴块法培养,但细胞长得不好,T175一瓶贴块约50块,只有2~3块爬出细胞,请教是什么问题?
$ Q. L' _5 G j- {! u- R3 u) K) x
/ Q/ m) o6 O2 x, o" S+ z6 B5 s, N
具体操作:
* Q! J7 b. F. R- Y
1、脐带PBS+双抗洗后处理,剥离血管。
7 p2 {/ k& E) v3 u3 T2 X8 z; }
2、洗洗剪碎成2mm3左右小块。
4 D" o; T* U% J+ d+ Q- ]
3、培养瓶用培养液润洗过。
1 v. c( R8 k) A. Q- H7 N m1 P
4、放好块倒置培养过夜,T175补液至20ml,每5天换液一次。
8 s. }5 A4 D- q7 d8 w$ ]7 `
5、培养液:DMEM+FBS+双抗。
* g3 u* p3 j8 `6 j' Y( G8 N
作者:
木头1102
时间:
2015-12-30 09:09
有可能是脐带的个体差异,或者放置时间过长;培养液如果配好之后放在4度冰箱时间长了,效果也不好。你是第几天观察到2-3块爬出细胞的,如果时间不是很长,可以在等等;如果时间挺长了,就传了吧,注意传代时细胞密度,可以把瓶里的组织块二次贴壁或者消化了,看能不能再获得点细胞。还有就是,组织块贴壁法最好只用华通氏胶。
作者:
jenny114402
时间:
2015-12-30 09:23
我们都用皿培养,你可以试试悬浮法培养,操作简单,正常基本7,8天长出细胞吧
作者:
haibara007007
时间:
2015-12-30 10:25
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jifengtang
的帖子
4 o$ t9 I- R8 R( k3 K" M8 z
1 p) n; m6 e9 t6 ^7 o
你可以试试把脐带剪得再碎一些,多贴一些,应该会比较好,我们现在都贴很小很多块,贴三个75t,这样基本都可以爬出来
作者:
张杉杉
时间:
2015-12-30 10:36
我也是新手,刚刚开始养脐带间充质干细胞,静置7天后观察,一个细胞都没长。不知道是脐带原因还是什么?
作者:
jifengtang
时间:
2015-12-30 11:33
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木头1102
的帖子
# ^5 `- v- X# Y
3 p5 h! ?% \, N
基本是9~11天有细胞爬出,2~3块,然后一周后还是只有这2、3块有细胞,其他爬不出来。做了好几个脐带都这样。个体差异是不是和母体有关,我做的母体年龄较大,都在30岁以上?
作者:
jifengtang
时间:
2015-12-30 11:34
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jenny114402
的帖子
; [- S" ?1 v# K
# o, H) S a( ~) X7 T5 i
悬浮法?是指酶解法吗?
作者:
jifengtang
时间:
2015-12-30 11:35
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haibara007007
的帖子
+ P: L" `2 z' c% I
5 w5 H- n, R, b* n
大概多碎?我现在剪成大概芝麻粒大小,再请教下。贴完后补液换液你是怎么操作的,我基本前3天补一点点保持湿润,第四天没块。
作者:
jifengtang
时间:
2015-12-30 11:36
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张杉杉
的帖子
/ j$ I6 o# I' O2 l
+ B+ n1 e0 {, V7 e+ i- H
培养液,血清用的什么?
作者:
张杉杉
时间:
2015-12-30 14:53
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jifengtang
的帖子
: p; G; F2 p! L6 @7 G0 B. B# O' J
& r. W! |$ K( `7 N* R
培养液用的HyClone的α-MEM培养基,Gibco的血清。已经静置培养7天,第八天换液后,又静置四天,今天观察培养基颜色,没有变化。
作者:
jenny114402
时间:
2015-12-31 09:02
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jifengtang
的帖子
9 P7 @2 T0 Q/ }- j
" J. z" g( \8 H, s2 u
不是,就是不让把组织块贴壁1小时这个步骤省了
作者:
haibara007007
时间:
2015-12-31 11:08
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jifengtang
的帖子
/ L0 B! p# X; y5 k+ z. S
& o" c* u' E1 C, _1 `( S
这样应该没什么问题,记得每天观察,注意液面就好
作者:
zsykdx
时间:
2016-1-4 10:45
第三步,你试一下不要润洗,我们实验室培养都不润洗,直接在皿上铺开组织块,然后再加培养基,这样的话组织块贴壁效果好一点,爬出的细胞会比较多。
作者:
yooung
时间:
2016-1-4 14:55
用T175培养瓶有点浪费哟
,T75就可以了。T175培养瓶才铺50块,有点少。组织块3~5mm间隔就可以了。
. }1 I+ s9 y3 P7 B9 j0 b3 i; f
不用润湿,贴好后竖直放置,再加入几ml培养液,竖直放置在培养箱3、4小时,再平躺轻晃润湿组织块,隔天补加培养基,就可以了。
作者:
jifengtang
时间:
2016-1-5 10:41
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zsykdx
的帖子
/ ]& l% h1 @/ ?8 w, G( }5 F
' x* [0 a0 ]# \# L
不润瓶的话,贴块后多久开始补液,补液几次,没次多少?
作者:
tlms1991
时间:
2016-1-5 16:26
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jenny114402
的帖子
/ D5 K# L' u( |. i1 O
! o# F, k. S( |$ q) x' U/ s3 u
你好,悬浮法培养是怎样的???求赐教!!!
作者:
tlms1991
时间:
2016-1-5 16:26
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jenny114402
的帖子
( e4 I; e: p% p0 N+ O# d
# j8 o& q# J; x. Y" Y% ~
你好,悬浮法培养是怎样的???求赐教!!!
作者:
jenny114402
时间:
2016-1-6 11:56
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tlms1991
的帖子
: b- u$ X+ k, O4 H6 e
: z: ~9 D1 H; l. E, B' O! t& u
悬浮法就是将剪好的组织块直接分到皿里,然后每皿加8ml 的无血清培养,搅拌让组织块分散,然后就放培养箱培养,省去贴壁这一步骤;培养过程中组织块可能自己会贴壁,那就让它贴吧。
作者:
张杉杉
时间:
2016-1-6 14:20
我的脐带间充质干细胞在12天的时候都长出来啦。在第八天的时候一半半量换液,一半直接加了半量培养基。如果按论坛里大家的说法的话,培养基多的话不利于贴壁长细胞,但是发现直接加培养基的反而细胞长出来的多很多,疑问?
作者:
细胞海洋
时间:
2016-1-7 12:51
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张杉杉
的帖子
# Z; ]; m/ F& o7 ~
7 n* D L7 s. I3 e. I2 s! e Y( _! a
建议你发新帖提问
作者:
jndxdff
时间:
2016-1-7 16:43
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jenny114402
的帖子
+ s3 ~7 @; n7 M# e/ ^9 r
P. `- y" _9 F4 l2 c
你好,请问华通氏胶如何分离
作者:
细胞海洋
时间:
2016-1-8 13:34
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jndxdff
的帖子
2 z; z; S+ x) ~. i
# f( ^. {( v7 @" R
搜索论坛 很多这方面的内容
作者:
1195963542
时间:
2016-1-8 20:43
1.剪得可能不够碎
# z1 Q0 ]6 X3 e
2.每2-3天观察一下细胞形态、数量和培养基的状态,然后补液或换液
8 Y- W9 Z/ U3 w8 }$ T( q4 _9 W9 N
作者:
1195963542
时间:
2016-1-8 20:46
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木头1102
的帖子
: j1 w3 h$ {' z
3 U5 K* \2 o) V
请问华通氏胶怎么从脐带上分离出来呢 肉眼观察颜色都比较浅 怎么辨别呢
作者:
1195963542
时间:
2016-1-8 20:49
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张杉杉
的帖子
4 U& m/ X/ f" i3 y! l
& }/ P4 g: t. z/ t. U: t* B
期间定期观察细胞状态,看看细胞生长情况,培养基状态 需要换液或加液
作者:
1195963542
时间:
2016-1-8 20:52
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jifengtang
的帖子
7 I2 e% M+ o' \5 Q5 C! B
* N: E! |, Z1 M7 V
不是 两者独立 悬浮法比较简单 酶解法操作麻烦点
作者:
jenny114402
时间:
2016-1-11 09:02
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jndxdff
的帖子
2 A0 {5 ?1 g( R1 a i0 q& l
0 V* n. K* \ s
肉眼还是能看出来的,一般华通胶是发黄透明,羊膜比较白,一条一条撕下来,我有时不分离羊膜和华通胶,细胞一般10天也能爬出来
作者:
duwenjing
时间:
2016-1-12 21:44
我是把华通胶剥离剪碎做组织块铁贴壁
作者:
haibara007007
时间:
2016-1-19 14:58
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jifengtang
的帖子
^4 }, C; f+ c% J, b
( b _" `% _1 o
这个大小可以,可以多贴点,在75t瓶中,67十都可以,你可以第一天换一次半量,3-5再换一次,你可以试试
作者:
tingting2113
时间:
2016-1-20 09:22
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jifengtang
的帖子
' O* K; Z% N' v. {' l1 z
9 `: [5 G6 z t. u! M
1、可以多贴一些组织块;
/ M X. r8 m* p
2、时间:一般一周左右出细胞,如果时间不够再等等,只要不污染基本都会有细胞;
$ |" p2 l' K+ ?6 _
3、组织要用华通氏胶,好贴而且不容易出现杂细胞。
5 o& O7 Q. d4 [
我的方案
; N" A4 G3 n; s1 d
1、脐带剪段,生理盐水洗,不用双抗
* y6 U V) n5 d7 D
2、除去动脉和静脉血管,撕华通氏胶(如果有血迹,再用生理盐水洗)
{+ d% Y. ] P9 C$ Y5 g
3、胶在离心管中剪碎
7 L" W0 @: I& D5 C
4、用培养液悬起组织块,加入培养瓶(皿)
7 J" K1 h: b- X% q1 m# l, N
5、补加合适量的培养液,培养
作者:
ghx2005
时间:
2016-1-22 15:16
注意铁壁组织块的大小,芝麻大小估计是太小了,破坏了太多细胞结构,再就是倒置培养的时间不要太长
作者:
孤独山石
时间:
2018-11-14 08:43
DMEM培养基不好吧 营养糖分太高 容易老化吧
$ r" E9 U: y7 Q; M
作者:
caoyue
时间:
2018-11-22 14:37
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jifengtang
的帖子
! K7 J! o" Z. M
+ l/ h/ O: t F( N8 `
剪这么小,接种的时候也这么小一块吗?有的时候接种块过小也不愿意爬细胞,可能本身里面就没有。
作者:
xyzwt1984
时间:
2019-1-14 15:52
组织块剪得过小,破坏组织结构,加了培养基后也容易飘起来,影响组织块贴壁。
作者:
大胖子阿哥
时间:
2019-1-24 15:25
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jifengtang
的帖子
( @# j4 E- H0 a1 X# [2 N+ H+ H) e. `
$ |/ Q! g1 ], x% A, ]0 M8 s
兄弟 你才贴50块 块太大了吧 我们这都200-300
作者:
大胖子阿哥
时间:
2019-1-24 15:26
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jifengtang
的帖子
' A9 _! B0 z/ X! \
1 v) d8 K b5 }8 A W
你才贴50块 块太大了吧 我们这都200-300
作者:
杨宗繁
时间:
2019-2-12 14:44
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jifengtang
的帖子
+ a# ^3 ~( m' L0 a" @
+ N! C$ p- k* s4 A4 X0 n
你不先把华通氏胶先剥离出来再剪碎吗?
作者:
Panda芹菜
时间:
2019-2-23 16:00
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jenny114402
的帖子
! j* K) b- I- B$ i
- R9 O9 l# `5 X; {( c" `
前辈您好!您应该是悬浮法分离脐带间充质干细胞的行家了!希望能跟您请教一下,悬浮培养过程中的换液时间和方法,以及您用的培养基厂家,期待您的回复!
作者:
Panda芹菜
时间:
2019-2-23 16:11
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tingting2113
的帖子
7 ?! x% k( e1 F/ d! B
' e4 C0 `; w: v( M1 Q
前辈您好!能麻烦您说一下组织块悬浮培养几天后补液加液吗?能否推荐一个好的培养基厂家?先谢谢您啦!
作者:
thomassun2008
时间:
2019-3-20 21:45
本帖最后由 thomassun2008 于 2019-3-20 21:46 编辑
3 E# i1 @5 C7 V8 r9 M
* u; m' j) D6 C! A9 L* u: p$ O
剪成肉糜状,1-3mm块,第一天接种加少量液体促进贴壁,3天后补全量液体,平常细胞放培养箱少去看皿,10天左右,贴20块就会有5块左右爬出来。我用的lonza加pall的解决方案+bFGF
作者:
屋檐上的乌鸦
时间:
2019-3-25 15:32
本帖最后由 屋檐上的乌鸦 于 2019-3-25 15:33 编辑
% j- S3 @0 Z% v+ \( q# e
8 c2 }4 `* N# H" }) l' G1 e( s
我刚开始也有上面新手说的问题,后来我的解决方法是:去除血管,尽可能多的获得华通氏胶,然后剪碎。将尽可能碎的胶置于T75培养瓶中,加少量培养液(1-2ml),湿润各个胶即可,等3-4个小时,观察胶是否粘附在瓶底(注意动作一定要轻,防止未粘附的胶滑动),如果都粘附了,则再次加入(1-2ml),第二天观察贴壁情况,再次补液至7ml。静待细胞爬出来~~~
; P C& t4 l( U: N+ I
希望能对各位有所帮助。
作者:
tgfdstemcell
时间:
2020-4-3 10:21
不要剪的太碎了 不好贴壁
作者:
tgfdstemcell
时间:
2020-4-3 10:22
可以撕成条状 贴后补液 注意控制好时间
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