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标题: 慢病毒感染人的间充质干细胞技术交流 [打印本页]

作者: yeshch 时间: 2017-11-9 10:32 标题: 慢病毒感染人的间充质干细胞技术交流

各位家友好！最近在准备慢病毒感染人的间充质干细胞（MSC）的实验，打算通过Lenti-virus对MSC进行基因的稳转过表达，恳请有经验的家友分享相关经验：
1. 常用的MOI是多少？
2. 如何感染效率更高？$ ~0 t4 x$ g6 n! } o/ ~) m
3. MSC的接种以及长到什么密度适合感染？* m/ v: o. b9 g9 L
4. 感染最佳时长？
5. 感染后细胞状态怎样？是否会影响增殖，感染后能够继续传代培养几代？
······提供经验分享或者相关资料9·8·5·3·4·0·2·6·2·@·q`q.c`o`m都可以哈！提前谢谢各位家友啦！

作者: fm100200 时间: 2017-11-9 15:03

生长融合80%左右，24h-48h，会影响细胞增殖

作者: yeshch 时间: 2017-11-14 09:56

没人理就自己顶个贴咯，快来人呢

作者: liuyasi2008 时间: 2017-12-14 11:29

细胞密度50%-70%；MOI值50-100；感染时高浓度病毒孵育细胞，过夜感染，换液；感染后一般不影响状态。

作者: yeshch 时间: 2017-12-15 09:43

回复 liuyasi2008 的帖子; k- L4 s4 L# V; {: ~" N
: A/ f& m, ~3 Q; z" R6 h' p
谢谢，但是moi这么高细胞状态不会受影响？请问您有没有数据支持呢，或者发表的文章？

作者: yeshch 时间: 2017-12-15 09:44

回复 fm100200 的帖子

Thanks♪(･ω･)ﾉ

作者: liuyasi2008 时间: 2017-12-22 10:10

感染过这个细胞，感染效率80%以上，传了一次代，收细胞做了PCR检测。可以感染2-3个梯度孔。10，30，50.根据感染效果再调整。

作者: yeshch 时间: 2017-12-24 10:58

回复 liuyasi2008 的帖子7 c. k6 v: h1 s [8 U% g j" I& _

Thanks♪(･ω･)ﾉ时间紧任务重没有时间预实验了

作者: yeshch 时间: 2018-1-29 10:28

病毒倒是感染上了，也能看到GFP，但是细胞基本不扩增，传代之后也长不起来怎么回事啊（未感染的对照组长得很好）？有没有做过的前辈传授一下经验啊？感染前后的传代密度，培养基什么的有什么特殊要求吗？

作者: ielisa 时间: 2018-1-29 10:45

和我当时的实验有点像啊，也是细胞不长，还有挂掉的~~~

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