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标题: 一个有趣的现象（附图） [打印本页]

作者: 饶冠华 时间: 2010-10-13 19:50 标题: 一个有趣的现象（附图）

本帖最后由细胞海洋于 2010-10-13 20:14 编辑 3 j* u7 N+ R# ^) ^( ~; ?
9 @; d& {9 S3 K/ Q5 j/ J' Q
我的实验需要从病人样品中分离肿瘤细胞，在某次的分离操作之后，分离出了很多正常癌旁组织的fibroblasts 和癌组织中的TAFs (tumor-associated fibroblasts)，TAFs长满了，过了一段时间没有传代之后，发现TAF生长密集的地方长出来了一个个小的克隆，这些克隆不是肿瘤细胞的，而是fibroblast积聚而成。但从癌旁组织中分离的fibroblasts却不存在这样的现象。不知道其他人有没有过这样的经历，当然我没有检测过干细胞基因的表达情况。如果发现干细胞基因有表达的话，那将会是一件更有意思的事情。上图：[attach]15147[/attach][attach]15148[/attach]

作者: supergama 时间: 2010-10-13 20:41

很有意思的现象，从CSC的角度考虑是不错的，毕竟很多CSC的培养都是以细胞聚集成球的形式进行的。但从描述来看TAFs聚集的地方才出现而癌旁组织的成纤维细胞不出现，是否可以如下解释：TAFs由癌组织中分离，失去了接触抑制，所以能够聚集成集落状，而癌旁组织的成纤维细胞仍属正常成体细胞，存在接触抑制所以不能够聚集成集落状？

作者: 饶冠华 时间: 2010-10-13 21:54

回复 2# supergama , ]- v/ w9 \0 A2 X8 a% o' c3 f

呵呵可以这么说吧但是我想到的是另外一件有意思的事情，就是当前IPS也不就是用某些方法诱导fibroblast 成为stem cell吗？如果肿瘤的TAF长出来的克隆也能表达干细胞的marker的话那岂不是又多了一条途径？

作者: supergama 时间: 2010-10-13 22:26

回复 3# 饶冠华 3 V' ^4 ]" p v' T
呵呵，不错的思考角度，有的癌细胞和胚胎干细胞有些重叠的表达谱，好像一些肿瘤细胞和一些细胞系本身做iPS会高效些，是否这里的TAF也会做iPS高效些？

作者: smkx 时间: 2010-10-17 16:09

上图第一个形态的集落我经常发现，是用正常13.5dpc小鼠做MEF后复苏看到的。我一直以为是没有打散的fibroblast组织块形成的。

作者: lebeilin 时间: 2010-10-18 19:46

有意思有意思，检查一下SSEA2和OCT4的表达量吧，我等着你的后续报告呢。

作者: renlin0101 时间: 2010-10-19 09:44

来学习学西

作者: open1230 时间: 2010-11-1 23:11

个人认为检测下相关肿瘤干细胞标记物，说不定会有发现。

作者: hltdym 时间: 2010-11-7 21:21

取一小块出来还能形成聚集吗？

作者: 饶冠华 时间: 2010-11-8 08:40

回复 9# hltdym ) o3 F: B7 O$ P

长满之后还会变成这个样子的

作者: ivy叶子 时间: 2010-11-9 15:44

学习

作者: forshoyu 时间: 2010-11-10 20:56

回复 1# 饶冠华
如果那些细胞可以堆垒生长说明已经失去接触抑制，这就具备了肿瘤细胞的一个特性了。你可以取那些细胞做个HE染色或者是免疫荧光初步看看它们到底是什么东西，接下来的讨论才会有意义。

作者: starlancer 时间: 2010-12-24 11:37

看到上面图，我第一反应以为是胚胎干细胞呢

作者: 千细胞 时间: 2010-12-24 12:12

这个让我想到一个以前听到一个讲座
这个现象和接触抑制相关，还有P53通路相关，这个研究者在美国做的这部分工作，具体细节不清楚了，他有两个改造的成纤维细胞系来证明这个结果。对他的实验部分，就是用刮子刮成纤维细胞来得到这样的克隆，也具备干细胞的相关标记。5 h% n% q% R9 P1 }
这个还是一年前的事情，估计现在文章都出来了，有兴趣的话可以找找看，估计会给楼主一些提示。

作者: sunsong7 时间: 2010-12-24 19:13

可以做一下流式或畸胎瘤试验，是否具有iPS/ES的特征？

作者: dabai22222 时间: 2011-1-9 20:02

千细胞发表于 2010-12-24 12:12
4 N- _; G7 Y8 Z, A- ^这个让我想到一个以前听到一个讲座4 Y, T6 l- u- ~& O, X6 |
这个现象和接触抑制相关，还有P53通路相关，这个研究者在美国做的这部 ...

! k0 L' z/ y/ m5 E
是这篇paper吧' H7 W) U4 z0 F$ y4 K9 U
Mouse Fibroblasts Lacking RB1 Function Form Spheres and Undergo Reprogramming to a Cancer Stem Cell Phenotype$ U1 G; O- l6 T) Z v
Activation of the RB1 pathway triggers the cell-cycle arrest that mediates cell-cell contact inhibition. Accordingly, mutation of all three RB1 family members leads to loss of contact inhibition and outgrowth of fibroblasts into spheres where cell-cell contacts predominate. We present evidence that such outgrowth triggers reprogramming to generate cells with properties of cancer stem cells. Fibroblasts with only a single RB1 mutation remain contact inhibited; however, if this contact inhibition is bypassed by forcing the RB1 / cells to form spheres in suspension, cells with properties of cancer stem cells are also generated. These cells not only form tumors in nude mice but also generate differentiated cells. We propose that contact inhibition imposed by the RB1 pathway performs an unexpected tumor suppressor function by preventing cell outgrowth into structures where cells with properties of cancer stem cells can be generated from differentiated somatic cells in advancing cancers.

作者: deron 时间: 2011-1-10 16:38

到目前为止，个人认为真相在貌似最不起眼的smkx板油那里。因为我们养的细胞实验处理结束后不舍得扔，经常就忘在培养箱里几个星期，最后很多过密的细胞就会出现如楼主所述的组织块儿样集落。
没有重复实验的支持，没有表面标记的验证，讨论也只能是留在屏幕上停滞不前。

作者: dnarna 时间: 2011-1-17 16:18

1. 体外培养细胞偶尔会发生自发转化形成 spontaniously immortalized cell (基因表达上与癌细胞有所区别, 是否相当于体内良性肿瘤不好说). 有报道认为成纤维细胞形成的几率较大.6 [" b3 Q- b, S1 E4 a* j7 @% D9 i
2. 不一定非得锚定"干细胞" (如果想继续研究的话,与同一组织的正常细胞、癌细胞做些基因表达谱分析也许有点意思), 当然其可能的来源也许是干细胞也许是分化细胞. t8 v% g" }7 F- }& q
3. 第一张图中的细胞团分散后应能再长 (看看是不是还能聚集生长),第二张中细胞团脱离不好再长.; T" z8 G9 B# |" g
4. 如果正常组织中这样出现的几率很高, 而癌组织中几率极低(或没有), 那么是不是可能存在着癌细胞分泌某些因子抑制其内部非癌化细胞的其它转化....?

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