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标题: 如何拉针、锻针、磨针………… [打印本页]

作者: hyde 时间: 2010-12-20 18:44 标题: 如何拉针、锻针、磨针…………

如何拉针、锻针、磨针…………如题

作者: moluxingke 时间: 2010-12-20 19:34

是不是那种用玻璃管烧红后拉成的玻璃针？口吸管上用的？两手捏住玻璃管两端，将玻璃管在酒精灯火焰上烧红后，迅速撤离火焰，撤离火焰后两臂立即向边伸开，伸开的速度越快，玻璃针拉的越细，当然太快了针容易断。拉的慢了又拉不开，在火焰上方拉最容易拉断。具体技巧需要在练习中体会摸索，拉细的玻璃针需要用砂轮从中间切开，一分为二，断口处一般不会出现那种带刺状的突起，如果有突起，将针头在砂轮上轻磨几下即可，然后将断口迅速在酒精灯火焰上来回挥动几次，将断面烧熔，注意不可太慢，否则玻璃熔化就堵住针口了。
技术不难，练习一下就好了，希望对你有帮助。

作者: hyde 时间: 2010-12-20 20:45

谢谢……哪用机器做的呢……有些参数（主力、辅力、温度等）的，感觉很难调试…………

作者: songzxj 时间: 2010-12-21 09:44

这些参数都是根据不同的玻璃材质、玻璃管的粗细、管壁的薄厚以及你所需要使用管的长度粗细来定的，所以很难直接给一个固定的参数。其实，你只要知道了主力、辅力、温度三个参数，每调整一个参数是，管是怎么变化的，多练习，凭经验来拉制出你要的管了。这几个参数的作用，你可以问一下仪器的工程师，其他的基本就靠你自己了。

作者: deron 时间: 2010-12-21 10:52

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传说中的人工受精？用于卵母细胞的预处理么？是要从头进行胚胎干细胞的培养吗？

作者: deron 时间: 2010-12-21 10:54

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请教一下陌路行客，卵母细胞的冻存液、胚胎的冻存液以及它们的各自步骤可否提供？我只查阅到它们是用玻璃化冻存法……

作者: hyde 时间: 2010-12-21 18:22

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看别人做核移植之类的罢了…………

作者: chijun 时间: 2011-1-13 20:00

看的！每种针的要求不一样！参数是要根据铂金片以及玻璃针管进行设定的！请问你是要做哪一针？

作者: xiaomingxu 时间: 2011-2-11 10:37

去核针和注核针的制作
打开拉针仪开关，调节各个参数，取已经清洁处理好的玻璃管安装到拉针仪上，按下“start”，拉针仪自动拉出两根玻璃针，细针拉好后准备断针。打开断针仪开关，调节好针尖与加热玻璃珠之间的相对位置，将细针内径15~20μm部位与玻璃珠刚好接触，似接非接。将加热温度调整到20左右，踩下脚控开关，当看到玻璃针与玻璃珠刚好粘在一起时，而且玻璃管尖端有变弯的倾向时，松开脚控开光，由于热涨冷缩的作用，玻璃珠即可断开玻璃管的尖端，得到内径在15~20 μm的平口针。然后将断好的平口针安装到固定柄上，调整好针口与磨石之间的相对位置，小心将针口落在磨石上，调节磨石转速为3000 rpm，30 s后再使针管往磨石上落，当看到尖端有变弯的倾向时停下，持续1 min后即可升起针管，通过显微镜观察尖端是否已经形成斜口。将撤下的针管连接在20 mL注射器的内径为1 mm的硅胶管上，将针管放入20%氢氟酸溶液中洗涤，注意，从放入之前，就要一直推动注射器往外排气，以免氢氟酸进入破坏尖端内壁，堵塞针管。然后依次在四蒸水中洗涤5遍，放入针盒，自然风干（如果是用水磨则需不断往磨石上加水，氢氟酸处理这一步可以省掉）。风干好的针管安装在断针仪上，调节好玻璃管与玻璃珠的相对位置，使针尖位于玻璃珠上方（启动加热时加热丝膨胀到接触不到针尖为宜），踩下脚控开关，使加热温度在20左右，调节细螺旋，轻轻使针尖落下，接触玻璃珠后当发现其尖端有粘在玻璃珠上的迹象时，快速升起玻璃针，同时松开脚控开关。拨出的尖长度不应该超过5 μm。技术指标要求如下：通常情况下，从变细处到针尖尖端的长度不少于10 mm。这样操作起来比较容易控制，胞质或细胞在管内运动较为平稳。另外，管壁越薄越好，操作起来误差较少。还有，针尖斜面以45º为宜。
体会：把握要领，多练习，熟能生巧。- _7 V4 B# E. d) ]5 e

作者: xiangchou812 时间: 2011-5-20 18:09

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说的这么详细，高手啊。学习了。

作者: chliu 时间: 2011-5-24 20:49

回复 hyde 的帖子( z9 b6 M# X9 U0 j9 k
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注射针的制备分五步：拉、切、磨、尖、弯。
(1)拉：将外径为1．0mm、内径为O．75mm硼硅玻璃毛细管置于P一97拉针仪(Model P一7IVF)，设置ramp Valuc7l4，Heat 727，Pull 50，Vel l30，将中间长约lum的一段拉至外径为7um。
(2)切：将拉好的毛细玻璃管固定于显微煅烧器上，铂丝上的玻璃小球正好接触到毛细玻璃管外径为6–7um的部位，通电加热，直至毛细玻璃管刚与玻璃小球粘贴时断电，铂丝冷却回缩，将毛细玻璃管拉断，要求断端必须垂直、平滑、干洁。
(3)磨：研磨前，先用2 000磨砂纸及Milli–Q水清洗磨轮和小水池。将断端平滑、外径约6–7um的毛细玻璃管固定于EC一400显微研磨器上。磨轮下部有一小水池，浸泡磨轮约O．5cm轮转动时，整个平面均有水浸润，毛细玻璃管的尖端与磨轮接触，毛细玻璃管尾部连接一塑料软管，后者与5m1注射器连接，便于将研磨过程中进入毛细玻璃管的水冲出。施加一定的压力，将毛细玻璃管尖端磨成一个约30度–4O度角的斜面。要求压力适中，如太小，则不能完全将针尖磨后的毛细玻璃管在10％的氢氟酸溶液中冲洗5次，然后再用18ΩMilli–Q水冲洗5次。5 q- M& U7 s' D" z0 b5 Y
显微研磨器配置一放大500倍的倒置显微镜，以观察毛细玻璃管斜面的研磨过程。+ \7 t9 x W, [# S7 K1 O* A
(4)尖：磨好有一定斜面的毛细玻璃管，还必须在其斜面的顶端拉一小“鹰嘴”，以利于穿刺进入卵母细胞胞浆膜。将毛细玻璃管水平固定于显微煅烧器上，尖端与铂丝上的玻璃小球接触，通电加热一定时间后，迅速快捷地将玻璃小球撤离，则可在毛细玻璃管尖端拉成一个“鹰嘴”。“鹰嘴”不宜太长，因过长容易损伤卵母细胞而且难以将精子注入卵母细胞胞浆。
(5)弯：在显微煅烧器上，距毛细玻璃管顶端约1．5–2．0mm的部位加热烧弯至一定的角度(30度一45度角)，便于水平操作。, [( C$ _( ~# D, s7 I

作者: SCNT 时间: 2011-5-24 20:56

本帖最后由 SCNT 于 2011-5-24 20:58 编辑
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拉针、断针、磨针、拔尖和打弯等5个步骤，主要制作流程详细如下：3 |9 J. P7 H: l( l' b
拉针
观察水平拉针仪各部件是否完好，插上电源打开开关，按下已存拉针各参数数据代码+ENTR键进入拉针程序，即可显示各拉针参数（HEAT=656，PULL=125，VEL=10，TIME=10或HEAT=676，PULL=100，VEL=15，TIME=10），将消毒灭菌好的薄壁玻璃管小心安装到拉针仪上，盖好水平拉针仪盖，按下PULL键，系统自动运行听到“砰”的一声响并待数据恢复稳定后，打开上盖，小心取下拉制好的2根针管，统一插到聚乙烯泡抹盒内，并盖好上盖以防灰尘落到针管上，待全部拉好后统一断针。1 o b- }/ Z8 t. q ?; J
断针) C; }7 J% P4 ^% t+ `
观察断针仪各部件是否完好，插上电源打开开关，将水平拉针仪拉制好的玻璃针安装于断针仪固定臂上（垂直），旋转螺旋按钮，调节玻璃管尖端内径20-25μm部位与玻璃球的相对位置，并使玻璃管尖端内径20-25μm部位与玻璃球处于同一视野，并且在玻璃球的正右方，以玻璃球加热膨胀后刚好触到为宜，调节加热温度旋钮至20-30℃位置（具体温度根据玻璃球直径大小灵活调节），踩下脚踏开关，使玻璃管尖端内径20-25μm部位瞬间接触加热的玻璃球，同时观察玻璃管尖端有变弯倾向时，立即松开脚踏开关，由于玻璃球降温回缩，即可得到内经约20-25μm的平口玻璃针，然后升起断针仪固定臂，取下断制好的平口玻璃管，准备磨尖。 ' x$ @ }: t+ L4 E+ l7 P5 t+ H
磨针/磨尖
检查磨针仪各部件是否完好，插上电源打开开关，将磨针石上方的注水管装满Milli-Q水，并调节注水管针头控制开关，使Milli-Q水均匀滴下湿润磨针石，并且在整个操作过程中始终保持Milli-Q水均匀滴下。调节磨针角度控制旋钮定位于40-45°位置，并调节合适转速，将断好的平口玻璃管安装于固定臂上，旋转螺旋按钮，使平口玻璃管缓慢下降，快要接近磨针石的时候，停止下降。通过目镜观察，用微螺旋小心使平口玻璃管下降并慢慢接近磨针石，这时候会在磨针石上看到平口玻璃管倒影，当与磨针石上倒影吻合时再稍微下降即可，停留片刻，当看到针管内水注上升后停止磨针并升起固定臂即可。
拔尖/ {! d4 r/ B: H, C+ ?% b. \" I
打开断针仪开关，将磨好的针管安装于断针仪固定臂上（水平或垂直均可），旋转螺旋按钮，调节针尖与玻璃球的相对位置，使针管尖端与玻璃球在同一视野，并使磨面朝向自己，且在玻璃球的正上方，以玻璃球加热膨胀后无法触到为宜，调节灯光亮度范围30-40，加热温度旋钮至20-25℃位置（具体温度根据玻璃球直径大小灵活调节），踩下脚踏开关，调节微调旋钮，使玻璃管针尖瞬间接触加热的玻璃球，同时观察玻璃管尖端有粘到玻璃球上倾向时，立即松开脚踏开关，同时迅速升起固定臂，即可得到符合要求的针尖。 9 p. w% d. q9 h) E

作者: SCNT 时间: 2011-5-24 20:59

本帖最后由 SCNT 于 2011-5-24 20:59 编辑

拉针、断针、磨针、拔尖和打弯等5个步骤，主要制作流程详细如下：
拉针
观察水平拉针仪各部件是否完好，插上电源打开开关，按下已存拉针各参数数据代码+ENTR键进入拉针程序，即可显示各拉针参数（HEAT=656，PULL=125，VEL=10，TIME=10或HEAT=676，PULL=100，VEL=15，TIME=10），将消毒灭菌好的薄壁玻璃管小心安装到拉针仪上，盖好水平拉针仪盖，按下PULL键，系统自动运行听到“砰”的一声响并待数据恢复稳定后，打开上盖，小心取下拉制好的2根针管，统一插到聚乙烯泡抹盒内，并盖好上盖以防灰尘落到针管上，待全部拉好后统一断针。
断针
观察断针仪各部件是否完好，插上电源打开开关，将水平拉针仪拉制好的玻璃针安装于断针仪固定臂上（垂直），旋转螺旋按钮，调节玻璃管尖端内径20-25μm部位与玻璃球的相对位置，并使玻璃管尖端内径20-25μm部位与玻璃球处于同一视野，并且在玻璃球的正右方，以玻璃球加热膨胀后刚好触到为宜，调节加热温度旋钮至20-30℃位置（具体温度根据玻璃球直径大小灵活调节），踩下脚踏开关，使玻璃管尖端内径20-25μm部位瞬间接触加热的玻璃球，同时观察玻璃管尖端有变弯倾向时，立即松开脚踏开关，由于玻璃球降温回缩，即可得到内经约20-25μm的平口玻璃针，然后升起断针仪固定臂，取下断制好的平口玻璃管，准备磨尖。 ! A" S" ]2 n9 l0 |1 t7 d8 U
磨针/磨尖$ v8 g9 `6 P3 y
检查磨针仪各部件是否完好，插上电源打开开关，将磨针石上方的注水管装满Milli-Q水，并调节注水管针头控制开关，使Milli-Q水均匀滴下湿润磨针石，并且在整个操作过程中始终保持Milli-Q水均匀滴下。调节磨针角度控制旋钮定位于40-45°位置，并调节合适转速，将断好的平口玻璃管安装于固定臂上，旋转螺旋按钮，使平口玻璃管缓慢下降，快要接近磨针石的时候，停止下降。通过目镜观察，用微螺旋小心使平口玻璃管下降并慢慢接近磨针石，这时候会在磨针石上看到平口玻璃管倒影，当与磨针石上倒影吻合时再稍微下降即可，停留片刻，当看到针管内水注上升后停止磨针并升起固定臂即可。

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