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标题: 斑马鱼胚胎显微注射（QT格式） [打印本页]

作者: jdrkna 时间: 2011-2-26 15:52 标题: 斑马鱼胚胎显微注射（QT格式）

本帖最后由细胞海洋于 2011-2-26 18:22 编辑 G# a2 T, e. I7 [/ ?7 G
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作者: cjybz 时间: 2011-3-7 16:13

哎，级别低了就是没办法，正好做这个好像下载看一下，结果下不来，楼主能否给俺发一份啊，感激不尽.邮箱：chinanhzau@163.com非常感谢

作者: raul0310 时间: 2011-5-29 11:31

我下不了，急需此资料。楼主传一份给我。邮箱：duchangchun86@163.com.谢谢！

作者: lingfeng660101 时间: 2011-5-29 23:58

真郁闷。新人，刚来，下不了啊，麻烦lz传份 121814507@qq.com,谢谢！

作者: jdrkna 时间: 2011-5-31 14:38

回复 lingfeng660101 的帖子. A% ~7 g3 H+ ~5 {. a# ?! d
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已经发过去了，不用谢

作者: believemin 时间: 2011-11-15 23:34

你好，我也很急需你的资料，可以发给我么 tina26609342@126.com 非常感谢

作者: 姚文杰 时间: 2012-3-22 14:36

下载不了~能不能给发一份~857956017@qq。com不胜感激

作者: houliming 时间: 2012-3-24 22:49

没有资格下载，麻烦楼主传一份，谢谢了。

邮箱：mnhouliming@126.com

作者: ying 时间: 2012-3-24 23:37

呵呵～我改做干细胞之前就是专门做这个的：）兄弟姐妹们要是有问题我也许可以帮点忙。我会注射，斑马鱼原位杂交，斑马鱼拍照（活的和杂交显色过的），体外合成注射用的RNA，和一些其他基本操作。

作者: 珊野love 时间: 2012-3-30 13:56

回复 ying 的帖子) E5 L# k C; k$ Q8 N4 l' i9 b. d
K% l; U2 C) d6 ~
我现在要做斑马鱼的显微注射，请问注射的最佳剂量和针的直径大概多少啊，还有注射时怎么能找到斑马鱼的动物极，谢谢了~~

作者: 珊野love 时间: 2012-3-30 13:57

回复 jdrkna 的帖子% h) W' Q5 h$ M

楼主能不能发给我一份啊，等级太低下不了，谢谢了，邮箱taoran0227@163.com

作者: ying 时间: 2012-3-30 14:53

回复珊野love 的帖子0 P* C$ I" u; i; R

我一般打1-2nL. 注射针我们是在鱼房做的，他们有个拉针的机器，我不知道他们怎么设置的参数。针也有不同类型的，你是要打算自己买自己手工拉吗？& u, H! f6 }' X( W% w. n
我打动物极的方法是，先把鱼卵在琼脂板上（那种特制的带有凹槽的那种，你知道的）排好，然后用个拉过的枪头（火烧一下，化了之后一拉，拉成不粗不细的一根丝丝）一个一个拨，拨得动物极朝上。然后再打的。之所以要用拉过的枪头来拨，是因为比较软不容易刺穿卵，又比较长容易操控。
话说，你如果不是做转基因鱼，而是仅仅是打morpholino或者合成的mRNA或者类似的小分子，是不必要打动物极的，任何一个角度打了，尽量往卵的正中间插，打了就行了。9 ]6 Z+ B: r% G+ [
在卵产出后10-20分钟，动物极一侧是透明的，另一侧是卵黄，很容易看见的。如果看不见，稍微把卵拨一下换个角度就可以看见。一般正常情况下，动物极是自然朝上的，所以拨一下就能看见。在45分钟之后，动物极就开始分裂了，就更容易找到了。& g3 ^1 _6 Z# ?# ?. V1 I) h9 b

作者: ying 时间: 2012-3-30 14:58

回复珊野love 的帖子

注射mRNA一般可以打400-800pg每个卵，注射morpholino一般是4ng-8ng。多了会有非特异性的表型。

作者: 珊野love 时间: 2012-3-31 09:45

非常谢谢，我是做转基因的，第一批检测结果就是没有转进去，当时因为找不到动物极就直接扎到卵黄中间的位置了，因为放在培养皿上没有水，卵还很小，所以看不到动物极，你说的琼脂糖的那个孔是胶孔还是有特殊的专门显微注射的那种啊~~

作者: 珊野love 时间: 2012-3-31 09:47

回复 ying 的帖子( P+ [0 t, }1 \) R% u' o
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注射针我们也是用拉针仪拉的，里面也有好多程序，但是不知道哪个好，有的特别细都打不出来液体~~

作者: ying 时间: 2012-3-31 12:01

回复珊野love 的帖子
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话说，你是用的体视显微镜操作么？体视显微镜下面看，是一定可以看到的啊。卵再小，倍数调高了也是很大很大的啊。不用体视显微镜估计没人能注射到动物极吧～) u4 b0 O7 d% y+ w
琼脂糖板子是有个专门的模具，模具扣到琼脂糖上面，凝固之后就成了几排槽子了。你是上海的吗？是的话我的可以借你先用。
我也不知道拉针是用什么程序。你可以询问一下清华（？）的孟安民组或者神经所的杜久林组，或者生化所的李逸平组，他们的程序是怎么设置的。你也可以按照各种程序都试试，然后选一个好用的嘛。

作者: 珊野love 时间: 2012-4-1 09:58

回复 ying 的帖子

非常感谢，我们用的就是专门显微注射的显微镜，我不知道是不是体式的，老师说找不到动物极，因为培养皿中没有谁，没法漂浮。我原来在上海那边，那边有好多同学，不过现在来哈尔滨啦，嘿嘿，离你们好远呀~~

作者: lizzychen 时间: 2012-4-28 10:36

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在做这个，但是级别低了下载不了，麻烦LZ给我发一份吧，谢谢哈！174499907@qq.com

作者: lizzychen 时间: 2012-4-28 10:39

楼主，你好，想问下你一般每个卵打多少量？定量你是用mineral oil测量液滴的直径么？期待回复，谢谢！

作者: runsong 时间: 2012-6-4 22:30

回复 jdrkna 的帖子
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我这里网速太慢了。请传一份) i% @9 I; \( Q% S& u
5595758@163.com

作者: 朱朱 时间: 2012-7-27 15:43

楼主，麻烦给我传一份好吗？我下不了。我马上要做斑马鱼，想多了解一下相关知识。

作者: caomengye 时间: 2012-8-29 07:04

楼主，我是新手，没有资格下载，麻烦楼主传一份，谢谢373543782@qq.com

作者: funking 时间: 2013-6-9 12:54

等级不够，能否给我一份 funking_2007@yahoo.com.cn 谢谢！

作者: xsl2013 时间: 2013-9-23 13:27

回复 ying 的帖子
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求指教，本人新人一枚，现在涉足这个，还望多多指教

作者: xsl2013 时间: 2013-9-23 13:28

楼主，，新人一枚，，这个下载不下来，，，还望发给我，，xsl2013@hotmail.com

作者: ericalt 时间: 2014-3-14 14:37

下不了，求一份709382869@qq.com，谢谢

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