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标题: 肿瘤干细胞分化了，怎么办呢？ [打印本页]

作者: cyumin123 时间: 2011-7-5 16:01 标题: 肿瘤干细胞分化了，怎么办呢？

我做的原代肿瘤干细胞刚开始还可以，后来传代传了一次，就离心后吹打了几下，养到第二天去看的时候小球都贴壁了呢，有的开始分化了，大家碰到这种情况都是怎么处理的啊，请指教啊!

作者: FreeCell 时间: 2011-7-5 16:14

本帖最后由 FreeCell 于 2011-7-5 16:14 编辑
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嘻嘻，你好伟大呀，继续努力！把体内所有肿瘤干细胞都弄分化可以获得诺贝尔奖！

作者: daviddow 时间: 2011-7-5 21:34

贴壁？无血清培养吗？
那还贴壁？估计你弄血清上去了

作者: 山羊 时间: 2011-7-5 22:22

是肿瘤干细胞球吗？3 X: ?* w7 y' N2 v$ B
不能传代，就不能说明是干细胞

作者: cyumin123 时间: 2011-7-6 08:23

回复 daviddow 的帖子% @0 Z. v* F& e4 O9 q
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没加血清，做原代的时候球还悬浮着，后来离心，换液，吹打几下就接种到新的瓶子里了，第二天去看的时候球贴壁了，球周边有一条一条的枝丫伸出来了，怀疑是分化，培养是用无血清的培养的。

作者: ellex 时间: 2011-7-6 08:41

分化成啥呢？

作者: daviddow 时间: 2011-7-6 13:38

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要是球，你就该用ultralow attachment dish, plate or flask。这样就不贴壁了

作者: huangcong1988 时间: 2011-7-6 13:40

肿瘤细胞分化了？朝什么方向分化的？还有，分化成啥了？肿瘤细胞要能分化，那是好事啊！You are so crazy ！

作者: huangcong1988 时间: 2011-7-6 13:41

而且干细胞传一代就分化？那还能叫干细胞吗？

作者: amosummer 时间: 2011-7-7 10:14

首先确定是否为真的肿瘤干细胞球，还只是一些聚集成团的细胞。如果真是的话，会不会培养条件发生变化了呢？还是操作不当，导致培养基中混有血清，可以再换下培养基看看。要不加大细胞因子的量，加入B27之类的因子试试。以上为个人意见，仅供参考！

作者: yzwongoing 时间: 2011-7-8 22:45

楼主v5，求图片上传下看看，我很是好奇。。还有楼主养的是什么肿瘤细胞？

作者: monk125 时间: 2011-7-9 19:08

dish 用的是贴壁的那种吧？？分化。。。。。。这个我真要厥过去了不过说不定是一伟大发现持续思考和关注啊

作者: monk125 时间: 2011-7-9 19:16

挣个积分真难不想要了

作者: 天依耶稣爱你 时间: 2011-7-9 19:26

一个可能就是不是肿瘤干细胞。请问你们的肿瘤干细胞是买来的。还是自己诱导出来的呀？

作者: cyumin123 时间: 2011-7-10 19:50

回复天依耶稣爱你的帖子7 ~5 M1 V- U. B4 g
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是自己取标本做原代的，要的是干细胞，现在球的状态是贴壁了，球周围有枝丫冒出，怀疑是分化呢，因为当初做神经干细胞原代的时候也有出现这种情况呢。

作者: yxc 时间: 2011-7-10 22:43

我也遇到过，据我分析，是细胞尚未纯化，目前常用的选择性培养基不可能从肿瘤标本中一下就能分离出干细胞、而淘汰掉肿瘤细胞，必然夹杂有肿瘤细胞，所以传代后贴壁，只有经过一定时间的培养、多次传代、逐渐消除掉肿瘤细胞及其他细胞，剩下的才是肿瘤干细胞，所以成功率不高。加油！

作者: cyumin123 时间: 2011-7-11 11:11

回复 yxc 的帖子

谢谢你的回答，今天我在丁香园看到有人这样写的：我们实验室里的脑肿瘤干细胞，在无血清即DF+BFGF+EGF+N2的情况下会呈球悬浮生长，但在有血清条件下会分化生长！所以当我们有时候碰到悬浮状态下干细胞状态不是很好的情况下，就加入血清，让它贴壁生长，当贴壁状态很好的时候，把分化状态的细胞消化下来，离心弃上清，再加PBS漂洗，离心弃上清（即把可能致干细胞贴壁的因素去除掉），后转移到无血清培养基中！干细胞照样能悬浮生长，而且这样能使干细胞状态变好！( v5 q; g2 f7 I- t& y
所以我觉得我的细胞贴壁了，但不是分化，请问你们是像上面一样处理贴壁的细胞球的吗？还有我想做分选，原代分选阳性率很低，是否可以将球传代几次后再进行标记分选？

作者: yxc 时间: 2011-7-11 23:00

细胞不是很多的情况下，没必要分成有血清和无血清两种条件培养，主要考虑到对时间、资源的占用增加，而经过两次转换条件而不一定产生更好、更多的目标细胞，所以我一般将悬浮细胞和消化下来的贴壁细胞放在一起继续在无血清培养条件下培养，直到看到觉大多数细胞悬浮，或者不幸的宣告失败。

作者: ycjzyh 时间: 2011-7-15 03:14

我养的CSC也会有个别孔出现贴壁现象，但好像不是细胞球贴壁，多数都是单个细胞。3 T5 t6 ]) i2 Y% L
另外，我的CSC状态不好时我也尝试过将细胞洗出来，放在普通板子加血清培养，细胞球会贴壁生长，但是消化离心后再放在低粘附板子内培养，没有觉得能改善，也许是我观察的不够仔细，反正没发现有影响6 \& Y# a1 [- r. Q( ^$ n8 F

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