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标题: 谁给我讲讲conditional knockout技术好在哪？ [打印本页]

作者: echowdk 时间: 2011-10-27 16:04 标题: 谁给我讲讲conditional knockout技术好在哪？

paper上一直在说，利用conditional knockout mouse可以在不同时间，不同组织器官观察或分析某一个基因的功能。在不同组织器官里观察还能想得通怎么做，但在不同时间观察我真不知道怎么做这个实验，谁能帮忙解释一下啊，先谢过了。

作者: chutu 时间: 2011-10-27 17:04

你可以在需要的时间给予诱导剂，诱导基因敲除呀

作者: echowdk 时间: 2011-10-27 17:32

回复 chutu 的帖子( R" @7 x1 H! X. |: Q+ E
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那就是说我在设计载体的时候，就得把这个诱导元件加上了是吗？

作者: goodboy 时间: 2011-10-27 22:29

是这样的，诱导元件在加入诱导剂后表达

作者: echowdk 时间: 2011-10-28 09:23

回复 goodboy 的帖子

哦，酱紫啊。谢谢。

作者: w343989328 时间: 2011-10-29 17:15

在特定组织表达的蛋白启动子后添加，比如说Cre酶，使得Cre酶在目的组织中表达诱导loxP位点的重组。。另外还可以建立标记跟踪系统，比如MARCM、MADM系统

作者: mansnoopy 时间: 2012-1-11 22:09

conditional knockout mouse可以在不同时间，不同组织器官. 首先不同组织器官：一般来讲构建c-KO模型用的是cre-loxp系统和flp-frt这两个系统。如，利用工具鼠vasa-cre。与flox的小鼠交配，就可以特异的敲掉生殖系统的基因，因为vasa在生殖细胞特异表达。其次时间的可控制性，vasa在胚胎十几天时开始表达，所以cre的活性也在此时启动，达到时间的可控制性

作者: wdx0502 时间: 2012-1-12 09:27

在构建好的两个转基因小鼠后，条件性基因敲除比较容易实现。所需要进行的最后一步操作就是让这两种转基因小鼠进行交配。所产生的子代小鼠同时具有Cre的外源表达基因和经过loxP修饰的目的基因，根据Cre表达的时空特异性就可以实现目的基因在特定组织中、特定发育阶段发生预期的改变。

作者: mansnoopy 时间: 2012-3-5 15:20

回复 echowdk 的帖子/ B8 T+ I' x+ f
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再补充说明一下，除了cre-loxp系统外，flp-frt也是很长用的系统，原理是一样的

作者: echowdk 时间: 2012-3-13 15:31

讲得都好官方。。。

作者: shylotte 时间: 2015-7-17 11:17

与以往的细胞示踪手段相比，Ｃｒｅ／ｌｏｘｐ系统的. u. d7 V$ _- s, C4 [
标记方式具有良好的靶向性，只会在表达组织特异
性启动子的细胞内发生，很大程度上避免了错误标. @3 P% v4 b5 }# d$ r- i
记的问题。此外，Ｃｒｅ／ｌｏｘｐ系统最大的优点是对基+ G" P! V4 k) W. z( R, s0 U
因组进行了修饰，具有遗传特征，发育过程中表达过
Ｃｒｅ的细胞以及其后代所有的细胞都会被永久地标. t; T2 W0 m/ e5 G4 M
记。然而，这一特点也导致无法对标记时间进行
控制。
为了解决标记时间特异性的问题，Ｍｅｔｚｇｅｒ等在) U% p8 e( w: I
Ｃｒｅ／Ｌｏｘｐ基础上制作了一种新的小鼠模型［１７］: q' B0 a2 a3 I
，这种  M) m  z. j2 \) ~
模型利用了雌激素受体为核受体的性质，借此调控3 A% Q: E' g0 l/ q+ V  x6 [3 a
Ｃｒｅ入核的时间。该模型中的Ｃｒｅ与经修饰的人类# h  h3 q' s* E5 b
雌激素受体配体结合域融合在一起表达（Ｃｒｅ-9 s8 ?9 P: R  N5 L4 U3 [4 I; z
ＥＲＴ
），该受体不结合雌二醇，对他莫昔芬（ｔａｍｏｘ-
ｉｆｅｎ）有亲和性。在没有他莫西芬的状况下，由于雌
激素受体停留在细胞质中，导致Ｃｒｅ也无法进入细8 E. S# l1 T" }# S  `& \
胞核，只有在外源性他莫西芬的条件下，Ｃｒｅ才能伴
随雌激素受体进入细胞核，实现对Ｌｏｘｐ片段的重组% e. k+ |) b  M4 I8 {6 `4 y; N
修饰。因此，只要控制他莫西芬的注射时间就能实9 H& U1 K# ?. W! {) q! G
现对敲除事件进行时间上的控制

——————二楼正解（其他确实太官方了），以上出自一篇中文综述《细胞谱系示踪》，通讯作者陈林

作者: moluxingke 时间: 2015-12-17 17:25

回复 echowdk 的帖子0 p+ {* e/ W O# @' o9 L2 p% ~; \" D- ^
! H5 P8 y9 ?3 w) w5 b4 }; j: ~
好吧，那就来个通俗点的，条件性敲除最大的好处就是你可以清楚地知道某个基因在某一种组织或器官里面发挥了什么功能，或者在某一个阶段发挥了什么样的作用。有些基因非常重要，全身表达，比如PTEN，你如果全部敲除，那小鼠就在胚胎期死了，你无法研究它在成体发育过程的作用了，但是换用了条件性敲除，这样就减少了胚胎期死亡的几率，你就可以单独研究它在肌肉了、肝脏了、卵巢了等地方的功能了。9 w7 C+ c5 q/ x
如果说某个基因全身敲除了小鼠也不死，那么小鼠要是有表型的话，你也不敢肯定到底是哪个组织里面的？比如某个基因X，你把它全身敲除了，结果小鼠不育，那到底是生殖器官的影响大呢，还是营养代谢出了问题呢？还是说神经的影响呢？

作者: moluxingke 时间: 2015-12-17 18:04

说道时间的问题，楼上用Vasa-cre的例子很典型，比如你要研究基因X在初级卵泡以后阶段的作用，可以用ZP3-Cre，如果想早一点，在原始卵泡活化阶段，可以用Gdf9-Cre，如果还想更早一点，可以用Vasa-Cre，就是这样了，

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