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标题:
关于PEG8000的配制问题
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作者:
huangcong1988
时间:
2011-10-30 22:21
标题:
关于PEG8000的配制问题
不知道40%的PEG8000怎么配制,有的说是直接用去离子水配,也有说用去离子水配后加氯化镁,到底是怎么配制呢?而且PEG8000是用来浓缩核酸的么?
作者:
john7812x
时间:
2011-10-31 08:52
聚乙二醇(PEG)在不同的盐溶液中可以结合形成孔径不同的网状结构,重组质粒是超螺旋的双链闭合环状DNA,它们与RNA 、线状DNA等其他杂质分子在PEG中的沉降系数不同。通过高速离心,使沉降系数较高的重组质粒DNA沉淀下来,而其他杂质分子和不同构象的质粒DNA分子被网状结构阻隔,从而纯化质粒。
! {/ ?! G) f' x+ D8 d! A7 g9 c
作者:
huangcong1988
时间:
2011-10-31 10:53
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john7812x
的帖子
' u% U* m& J3 _* V4 h4 \
/ H- A6 E2 w' R) J5 X4 m6 i
哦,纯化RNA也行是吧?那40%的PEG8000该怎么配呢?
作者:
zhusealin
时间:
2011-10-31 13:18
浓缩核酸的不太清楚。我们是用的50%PEG 1500做细胞融合用的,配的时候就用PBS溶解,高压灭菌
作者:
huangcong1988
时间:
2011-10-31 13:27
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zhusealin
的帖子
2 K Z7 Y6 D$ w, A, L; d5 U" M
( x3 J* |1 h; B$ ^0 w
是,PEG也用于细胞融合
作者:
john7812x
时间:
2011-11-1 09:30
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huangcong1988
的帖子
$ Y) t$ \! Y0 B" s; ]" e. V" t# X
: ^3 `1 N. [2 y$ q0 N
PEG8000可以纯化RNA,如网页中所述:
http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/16186.html
6 `; C$ @5 B; O6 D# }: [2 X
但是,我没有用过PEG8000提取RNA,我用试剂盒提取小量RNA,或用Trizol提取大量RNA。
" l" j, e6 P3 M; j1 E
/ K1 ] n' ~7 \; x( n! E) l
40%(w/v)PEG8000 用去离子水配,如文件中黄色部分所示:
' ]- h" c+ ~8 ~4 R- ]5 P
[attach]34950[/attach]
# _; \4 h" C8 }4 i
: A7 i0 w, @1 C+ {+ |- `2 K/ V
假如你打算用PEG8000 提取RNA,建议用DEFC处理过的去离子水来配制。
作者:
huangcong1988
时间:
2011-11-1 10:49
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john7812x
的帖子
1 S x/ }! ^) P$ v% c( J0 o
. O/ w8 a5 { v
不是提RNA,是浓缩,就是已经收集的慢病毒上清,想用PEG8000纯化一下,谢谢
作者:
huangcong1988
时间:
2011-11-1 13:41
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john7812x
的帖子
/ v, {" L7 i- j
. S7 C" l$ L2 U2 M
有道理,慢病毒上清要纯化的话呢?慢病毒是RNA+外壳(蛋白),那去离子水是应该用DEPC水处理一下
作者:
john7812x
时间:
2011-11-1 19:47
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huangcong1988
的帖子
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; i0 l" l8 ?) `! h5 o; |5 z( g3 E
你是不是打算浓缩Lentivirus,来提高它的滴度, 为下步感染实验做准备?
' k; `" _- U* x+ j
还是要浓缩Lentivirus 的RNA?
; b. h* v4 k. A
" ?. f1 v p9 c4 @5 s
若是为了提高病毒滴度可以超速离心的方法:[attach]34974[/attach]
$ F2 F9 m6 f8 |9 c9 Y
+ C- o5 W& Z) R: F
若是为了浓缩RNA,可以冷冻干燥,或沉淀RNA后再溶解,等等。
. `" Y* k( R/ {7 [$ K3 L
( J# g, J, I2 N; O& c- V
补充内容 (2011-11-1 19:54):
6 R/ w2 |& T K( z* e2 ]+ g: J
在这个超速离心的protocol 里用的是sucrose, 没有用PEG,可能和你实验室计划不同。
作者:
huangcong1988
时间:
2011-11-2 15:56
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john7812x
的帖子
8 u! t) P, x3 A8 Y% K$ z0 _
# L% Z- k% ^: K# t
非常感谢!我是为了浓缩慢病毒
作者:
huangcong1988
时间:
2011-11-2 16:44
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john7812x
的帖子
6 F& _/ A3 I( \: L. J
" k6 t9 H7 N2 B7 O
文章中好像是收集慢病毒的过程吧,当然高速离心能在一定程度上提高慢病毒滴度,但是浓缩。。。
作者:
wscookie
时间:
2012-7-9 15:44
学习一下
作者:
徒手撩萝莉
时间:
2017-11-30 16:55
想下载个文件
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