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标题: 成脂诱导 [打印本页]

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作者: sarah19860420    时间: 2011-12-28 23:36     标题: 成脂诱导

最近诱导人的TENDON STEM CELL。成骨很容易就做出来了，为什么成脂还做不出来呢，不是说成脂也很好做的吗？大家在成脂方面有什么又到经验，希望大家分享下，帮我找出问题所在，谢谢啦。, ~* X2 S' a0 D2 a( R& X" l

3 @( D3 h  @! _; M  T$ n还有成软骨诱导，形成的pellet是应该悬浮在培养液中还是最终会贴壁的？

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作者: luoziwei    时间: 2011-12-29 08:29

软骨诱导的pellet会粘在离心管底部，像换液的话直接倒培养液都不会倒出来的。你先染给我看看你的成脂肪分化培养基的配方

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作者: gact    时间: 2011-12-29 10:29

回复 sarah19860420 的帖子
$ W( y- j/ j% N, G+ ]. [( O/ {" S# N- c% ~- l& G8 y5 I
我很想知道你的protocol。。

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作者: sarah19860420    时间: 2011-12-30 00:36

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7 J& z9 b  U( T5 @9 Q' p3 z- y. ?- n- ^' a0 }
成脂,DMEM(L,因为我们这的一个老师说高汤低糖都没有太大影响，所以就选择了L)+10%FBS," T( H# Y0 n3 }3 g" \) w
1uM indomethasin, 0.5mM IBMX, 10-5M的dexamethasone , Insulin 5ug/ml.
: q/ I0 V7 h8 g5 r: L在这诱导过程中，细胞也死的挺多的，但是并未完全死光。是不是地塞米松的浓度太高了，我看还有用10-4M的呢。所以应该没什么问题吧。) g- [) W; J( H" _
3 Y7 R0 c. ?+ ?/ S! p& V" g( G) L
还有就是软骨诱导形成pellet如果黏在壁上，那黏住的那一部分就不会形成软骨了，对吗？

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作者: sarah19860420    时间: 2011-12-30 00:37

回复 gact 的帖子
( V6 |! t5 e) Y1 K) m2 E4 C3 @' j. C2 J  e' ~# ^
你是说实验过程，还是实验配方。成脂的还是软骨的

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作者: luoziwei    时间: 2011-12-30 09:01

回复 sarah19860420 的帖子
. ]2 U8 R1 V1 \# i
) d/ w/ J$ P* j6 v还是选择高糖吧，insulin加到10或者20，dexamethasone不算高，

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作者: luoziwei    时间: 2011-12-30 09:07

回复 sarah19860420 的帖子1 Q# s- p" j" P& F+ e& L' b
  M. i8 R4 N$ D& X- _" z
刚离心下来的细胞是一片沉在管底的，培养了3天后，片状的细胞会慢慢卷起来，形成球状，大概7天后，就开始分化了。你说的黏住的那部分，只是一小部分，就像一个球放在桌面上一样，因而我猜想它还是形成软骨的，但没去证实过。

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作者: gact    时间: 2011-12-30 11:17

sarah19860420 发表于 2011-12-30 00:37 & _6 s2 l* @; v# t8 l4 }
回复 gact 的帖子
% t$ l2 r9 m9 V/ Q/ |
# G' A/ I0 _0 d9 R3 }; B你是说实验过程，还是实验配方。成脂的还是软骨的

& ^8 a3 @: I5 c: `3 Omore is  better

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作者: sarah19860420    时间: 2011-12-30 22:44

回复 luoziwei 的帖子
4 W7 \4 r* e. F. y1 y& n- T
+ O3 O5 P) ]  ]- F" B7 Z多谢耐心回答

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作者: sarah19860420    时间: 2011-12-30 22:47

回复 gact 的帖子1 R" @& y! m0 \; W
; _% ~2 Q% c3 X, R2 D- q4 R
1.铺细胞，代细胞密度达到70-90%，加入分化液，之后每三天换一次液，培养21天后进行鉴定。9 g9 N; l: [- J7 u# Y9 W  B* R
2. PBS洗，10%福尔马林固定5min
9 C: U- q/ B* ]; f9 T, m# H9 K3 D3. 水洗两次
* ]( L9 J3 h) j3.Oil Red staning.
! m3 F9 ~+ s; Q4. 水洗几次。0 u) k' j) Q1 s1 y
5.OK了。

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作者: regene    时间: 2011-12-31 00:04

成脂诱导：. i" h2 `$ ^% |# q
如果细胞死的多，建议用10-6M的dexamethasone。. Q$ L1 u+ c. s8 H- C6 C2 q
还有，等细胞完全长满后，继续培养3-5天再诱导可提高分化效率

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作者: sarah19860420    时间: 2011-12-31 03:14

回复 luoziwei 的帖子2 G+ c1 C+ \% F, s5 ]

$ j# L* V! |3 t1 K0 e我想问下这里用高糖和低糖的区别？

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作者: sarah19860420    时间: 2011-12-31 03:31

回复 luoziwei 的帖子
" [; }7 E! Z1 N" \+ T- e- b: i: G5 C: `
最后一个问题，就是在这个分化液的DMEM+10%FBS含有抗生素会有影响吗？

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作者: gact    时间: 2011-12-31 09:11

回复 sarah19860420 的帖子- w9 h/ j# A# Q7 f* C# C: j
- ]3 {1 _5 w6 c6 g
谢谢，，+ @% `" I. }4 o0 z
很多文献报道是，铺板后细胞达到单层后开始诱导；0 c9 M2 _/ T+ W% M# w; M* T# I
也有人是长满后等待24~96h，加诱导液（dex\ins\IBMX）
" V$ b' E5 U5 _* C也有诱导7d，~21d的
+ l3 t6 y; G3 z* J根据你的实验结果，最好的条件是什么呢？9 v4 N* t9 a% c; g1 r8 N
猪的MSC；

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作者: luoziwei    时间: 2011-12-31 21:21

回复 sarah19860420 的帖子, H9 u5 s8 N8 j4 O& l, o, ~

6 S7 n$ F1 h4 {2 u# [+ G没有影响，我们都是自己配的DMEM。过滤的，肯定要加双抗

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作者: luoziwei    时间: 2011-12-31 21:23

回复 sarah19860420 的帖子
- G* y( e- ?, X+ V
+ s* F# ]2 y7 F# O高糖的营养高嘛，还能部分促进分化，因为一般用高糖培养的MSC容易自发分化。

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作者: sarah19860420    时间: 2012-1-3 05:07

回复 regene 的帖子  `# U7 M- g1 l# Q. T2 ^) `" J
; a( P5 x+ }1 ^) [
好的，谢谢

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作者: sarah19860420    时间: 2012-1-3 05:08

回复 gact 的帖子* v' t" f) }# g4 R$ H# w
) v1 c' e% @1 z3 e! U
我不做猪的MSC，我做的是人的TSC。文献报道的配方多种多样，我现在也在摸索条件。但是我之前写的那个配方是我们实验室用的都比较好的方法，你可以试试

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作者: sarah19860420    时间: 2012-1-3 05:11

回复 regene 的帖子1 F+ ]/ U  I! z, e: D* D: _
) u8 D& b! `; `/ T6 S/ a7 G
这是你的经验，可否有文献给介绍一下，想了解下缘由

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作者: sarah19860420    时间: 2012-1-3 05:13

回复 luoziwei 的帖子5 R' T" k" k0 o
, O, m* }& {: }% g+ j3 {
太谢谢了。从今天开始彻底改用高糖诱导

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作者: qiqishichaoren    时间: 2017-11-28 16:59

回复 sarah19860420 的帖子- {: C" y& N2 v+ C7 b

9 p) A0 ?6 s( L7 `2 J1 u( |2 a请问最后用高糖培养的效果怎么样呢？兄弟，还在做这行吗

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