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标题:
酶消化法 分离培养间充质！
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作者:
帝国黑骑士
时间:
2012-2-28 13:01
标题:
酶消化法 分离培养间充质！
我用组织贴壁法，养间充质，想知道，酶消化法都怎么做的，效果如何！
作者:
xiaopingzeng318
时间:
2012-2-28 13:09
1、准备好胰蛋白酶，浓度0.25%或0.125%均可；
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2、胰酶消化细胞：弃去培养液，用生理盐水洗涤一次，加入适量胰酶消化。
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3、消化时间要自己摸索下，室温2-5分钟，中途可在镜下观察，大部分细胞变圆一半左右细胞漂浮时，既可终止，过久会使细胞损伤死亡等。用DMEM或者生理盐水终止消化，用管吹打瓶或皿，收集消化液，再用生理盐水洗涤一次收到剩余细胞。
A, x3 ?% s, K5 K) u
4、将消化液离心，一般1000rmp离心10min。
1 P) J/ R K( H7 e ?: s7 n& w: b8 u
4、离心后弃上清，加入原培养液重悬，吹匀，取10ul细胞进行细胞计数，继续传代或者其他实验
作者:
owenlion
时间:
2012-2-28 21:52
你用什么组织做酶消化
作者:
owenlion
时间:
2012-2-28 22:15
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xiaopingzeng318
的帖子
# y& f$ ~1 h% z
0 K9 ]9 X) g7 G* n, L6 a
应该针对不同组织选择不同的酶吧
作者:
帝国黑骑士
时间:
2012-2-29 08:57
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owenlion
的帖子
: T# H5 d" _( {
' g! t7 g: c5 T
脐带间充质组织！
作者:
单个核细胞
时间:
2012-2-29 09:26
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帝国黑骑士
的帖子
: b ~( t; Y/ \- O
+ R& B! y% L! [; b, H; l ]% q, J
论坛里搜一搜。
) A% u' O& e3 a; P* U! v; c3 @
http://www.stemcell8.cn/search.p ... mp;searchsubmit=yes
作者:
xiaopingzeng318
时间:
2012-2-29 13:54
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帝国黑骑士
的帖子
9 w. b2 L& |6 @" ^( W- ~* d
; F' G4 g+ `7 I& J p( {9 h; _5 _
脐带间充质可以用胰酶消化
作者:
xiaopingzeng318
时间:
2012-2-29 14:16
不好意思，没说的很明白，原代的话用组织块培养，结果不错，没有用过酶，我说的酶是指后面传代的
作者:
owenlion
时间:
2012-2-29 17:13
这个评分的不专业
作者:
owenlion
时间:
2012-2-29 17:14
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帝国黑骑士
的帖子
* l2 c0 a, B% ^1 k
/ l4 T' d% y, D% N* u
酶消化有点难度，还是不做的好，组织块养的细胞还好点
作者:
liluli0715
时间:
2012-2-29 20:30
我们用二型胶原酶消化过脐带，根据脐带的长短及大小消化时间不一样，酶消化就是过滤有点麻烦，消化后细胞1-2就可贴壁，比组织贴壁快
作者:
细胞海洋
时间:
2012-2-29 23:30
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owenlion
的帖子
( Y9 w9 G) L2 J. t
) H2 G9 H g, k4 R
的确 可以说是相当不专业 主要是因为很多版主都很忙 所以绝大多数评分工作由我来完成。还望你原谅和理解。
作者:
nek314
时间:
2012-3-1 14:09
方法其实有很多，用几型胶原酶的都有，还有的是试剂公司自己的试剂盒，胶原酶分的会比较好，就是成本贵一些，细胞也比较杂，需要慢慢清除
作者:
zhj1988
时间:
2012-3-7 00:08
请问1000rpm 10min对细胞损伤不会很大吗，求解，大家一般用多少啊？
作者:
细胞海洋
时间:
2012-3-7 00:48
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zhj1988
的帖子
0 ^' ?2 w7 `# ?
, i3 X3 q; z' G) Y7 E+ q
建议你发新帖提问
作者:
细胞干
时间:
2012-3-20 08:38
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zhj1988
的帖子
8 ]( k |! k# u: F( x
$ H7 y/ L* e/ d f5 f J0 v
看你什么时候离心了，如果是酶消化法原代培养的话，可以用梯度离心法，2500rpm 15分钟，弃上清后稀释 1500rpm 15min，弃上清稀释 800rpm 10min；如果是传代可以用1000rpm 10min
作者:
yingjie
时间:
2012-3-20 10:13
Wharton胶组织的消化：
1 R2 ~6 L& q$ ^, B% }1 k
Wharton胶组织用剪刀剪成1mm3的碎块于是先准备好的装有0.1%胶原酶的
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小烧杯中，置于37度恒温培养箱中消化16—18h。
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加入适当体积的PBSA（PBS缓冲液中加入牛血清白蛋白，即BSA），一般是
. V' ~" H& v. i6 y8 i: \: L
胶原酶溶液体积的2倍，250g离心5分钟。
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弃上清液，加入2.5%胰蛋白酶（大约是沉淀物体积的2倍），37度处理30
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分钟，
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加入适当体积的FBS（消化酶体积的10%）中止消化。
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1200r/min离心5分钟,弃上清,用PBS清洗2次.
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用培养液重悬分离得到的细胞,用滴管吸取细胞悬液于培养瓶中,摇匀.取少
) P0 `+ `. I! c. }2 l" C; \: |3 A
许于细胞计数板,生物显微镜下观察计数,加入培养液,调整细胞悬液浓度大约在
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1*10 6/ml.置于37度,5%CO2的饱和湿度培养箱中培养.
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效果的话,还行吧,就是细胞出来的块,不过处理过多,对细胞影响较大,不是时间赶的话最好采用贴壁法
2 d8 y% |+ P/ Q
作者:
lyj-0017
时间:
2017-4-19 19:05
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liluli0715
的帖子
6 M) r3 Z( T4 S( X. i, j. I6 |
, C8 q, Q2 [/ }0 h- c
可否将你的酶消化方法分享学习一下？谢谢
作者:
lyj-0017
时间:
2017-4-19 19:05
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liluli0715
的帖子
, f6 r! y- y% V% l
0 ?9 E& l( j( D/ s. \
可否将你的酶消化方法分享学习一下？谢谢
作者:
yanxm920
时间:
2017-5-11 16:05
酶消化法会影响细胞的活力，建议用组织块法，获得的细胞活力和表型都非常好！
作者:
yangyaping
时间:
2017-6-12 11:57
用胶原酶消化
作者:
gsg040222
时间:
2017-6-12 14:05
我们用得是二型胶原酶，消化后长得不好，其实按照要求应该是用一型，但是考虑到成本问题，就用二型代替，结果是建议还是用组织块贴壁
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