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标题: CIK杀伤毒性测定 [打印本页]

作者: 莫邪小仙 时间: 2012-7-26 13:24 标题: CIK杀伤毒性测定

大家好，由于刚接触CIK太多不懂得地方所以想请各位给指导下。我们实验室做的是利用CIK杀伤癌细胞，最后测定效应细胞杀伤靶细胞的结果时用的是cck-8，将效应细胞和靶细胞共同培养，然后测定吸光度。我的疑问是，1. 由于采血样的不同分离培养后得到的CIK细胞的杀伤能力应该是不同的吧，那测定杀伤效果时效应细胞和靶细胞的比例该怎么取舍？2. 仅仅这一个实验结果是否太没有说服力，还有没有其他的方法检测其他的指标？3. 而且如何确定吸光度的变化就是由于靶细胞的死亡或减少造成的？

作者: Roden 时间: 2012-7-26 14:34

CCK8是有一定说服力的，但是这毕竟是一个整体细胞存活的反应，而事实上在杀伤实验中CIK本身同样会发生凋亡，如此感觉容易造成一定的误差。效应细胞与靶细胞比例可以参照文献，一般为5:1或者10:1等等。目前通用的方法是荧光染色法，用无毒染料染色靶细胞，而后在共培养的上清中检测染料的释放程度。
建议楼主到比较经典的杂志上，找几篇相关CIK文献，均有相关的实验说明。

作者: 莫邪小仙 时间: 2012-7-26 15:53

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非常感谢，我刚开始想到的也是用荧光标记，但是不知道目前哪种效果比较好。还有，能否给推荐几篇相关文章或者经典的杂志，主要是对这方面还不太了解，不知道权威的杂志有哪些，谢谢了。

作者: Roden 时间: 2012-7-27 10:53

影响因子5以上的杂志，都不错。你用文献搜索引擎搜索关键词，然后挑好杂志的文章来看就行，影响因子可以现查。
BLOOD就很好。

作者: 莫邪小仙 时间: 2012-8-2 13:24

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你好，想问下检测荧光染料的释放程度是用哪种仪器来检测

作者: 蓝O海 时间: 2012-8-22 10:06

你用的什么方法做的杀伤性实验啊？我们现在用mtt法，只要是带荧光的肿瘤细胞于杀伤性细胞共同培养后，检测肿瘤细胞减少量来衡量杀伤性的。

作者: 莫邪小仙 时间: 2012-8-22 16:38

回复蓝O海的帖子
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目前还是用的cck-8，你说的用荧光标记靶细胞吧，若是这样的话就不用mtt了呀，直接测荧光释放量就好了。而mtt是染色活细胞的，用酶标仪测吸光度就好了呀，难道你是这两种方法结合起来用的？在做mtt时也加进去荧光标记了？

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