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卵母细胞激活时6DMAP的配制
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作者:
lmh_yixue
时间:
2012-8-7 10:07
标题:
卵母细胞激活时6DMAP的配制
我在用Ca +6DMAP法激活卵母细胞,请问6DMAP是之前师姐配好的100mM放在-20℃保存的。为什么融化后6DMAP没有溶解?常温吹打后也没有溶解。师姐的配方是:6-DMAP 100mg +
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超纯水 6.128ml 。请问6D的溶解度是多少,进一步稀释成5mM的应该怎么处理?
作者:
文文2012
时间:
2012-8-7 10:28
6-DMAP微量配制浓度太大,很难溶解的,最好用DMSO配制或工作液时候再配制
作者:
BenHantun
时间:
2012-8-7 12:06
我们用来激活牛卵,终浓度配成2mM, 用DMSO先配成100*或者1000*,使用时再稀释,
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配制100*方法:0.0163g 6-D溶于0.5ml的DMSO中,最好配的浓度大一些,这样用的DMSO就少,对卵母细胞损伤小。
作者:
lmh_yixue
时间:
2012-8-7 21:15
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BenHantun
的帖子
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非常感谢,我的师姐(已经毕业)保存在-20℃的是100*的,终浓度是2mM.她的论文里写的是用超纯水 6.128ml+6-DMAP 100mg 。但是我发现6DMAP根本就没有溶解。后面是用1026来稀释成2mM的。我每次把卵细胞放到2mM的6DMAP中都发现卵细胞有皱缩现象,之后放到1026中就缓慢的变好了。是激活时本来就是这种现象呢还是6DMAP有问题?如果按照你说的方法,那么开始的100*应该用DMSO配制才可以对吗?
作者:
lmh_yixue
时间:
2012-8-7 21:19
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文文2012
的帖子
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非常感谢!!请问工作液时再配制是怎么做呢?我的师姐(已经毕业)保存在-20℃的是100*的,是用超纯水 6.128ml+6-DMAP 100mg配成的 。但是我发现6DMAP根本就没有溶解。后面是用1026来稀释成2mM的。工作液是不是就是后来我用1026来稀释所得的?
作者:
BenHantun
时间:
2012-8-9 10:15
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lmh_yixue
的帖子
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浓储液用DMSO配置,最后用发育液稀释至终浓度
作者:
lmh_yixue
时间:
2012-8-14 10:31
本帖最后由 lmh_yixue 于 2012-8-14 10:33 编辑
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BenHantun
的帖子
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请问你用A23187吗?A23187有“钙离子载体A23187”,和“A23187(钙镁混合盐)”应该用哪一种?这两种分子量不同。可以告诉我你用的是哪个公司的吗?还有货号
作者:
BenHantun
时间:
2012-8-15 09:05
我们用的是离子霉素(Ionomycin from Streptomyces conglobatus,Sigma I9657)
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没用过钙离子载体。
作者:
lmh_yixue
时间:
2012-8-15 22:17
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BenHantun
的帖子
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Thank you so much
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