干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 细胞培养中的支原体污染的预防及处理 [打印本页]

---

作者: wcforever126    时间: 2012-8-10 18:15     标题: 细胞培养中的支原体污染的预防及处理

各位前辈们，一起讨论下，不对之处还请指证。
- f* |$ Q& u' ?: Q' N7 G, c! s; yMycoplasma国内主要有三种译名，医学文献译为“支原体”（分枝原体，枝原体，类菌质体），动物医学文献译为“霉形体”或“支原体”，台湾、香港则译为微浆菌。
, L; o' z( g( g/ M5 p% T5 V
1 B0 t, h9 r) @支原体是目前已知一类能在无生命培养基上生长繁殖的最小的原核细胞型微生物。自然界分布广泛，种类多，有80余种，分为两个属：一为支原体属（Mycoplasma），有几十个种；另一为脲原体属（Ureaplasma），仅有一种。与人类感染有关的主要是肺炎支原体和解脲脲原体。 ) W- d8 K7 R3 s- n- \; A. R+ d
2 Q) u) G% w9 M; @2 a
支原体无细胞壁，多呈不规则球状、长丝状，可分枝，营寄生共生或腐生。一般侵害对象为动植物，可造成多种疾病。 $ W5 o; d( f, R8 ~. z3 h

2 |4 j- c" f/ K& u细胞培养（特别是传代细胞）被支原体污染是个世界性问题。国内外研究表明，95%以上是以下四种支原体：口腔支原体（M.orale）、精氨酸支原体（M.arginini）、猪鼻支原体（M.hyorhinis）和菜氏无胆甾原体（A.laidlawii），为牛源性。国外调查证明，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。 0 n/ H2 O# p( d, X- H
' Z. N' I2 j6 D. k, ?9 f
支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染（某些支原体在人体是正常菌群）、培养基的污染、被污染细胞造成的交叉污染、实验器材的污染、制备细胞的原始组织或器官的污染，等等。
4 P7 \/ S7 E4 o( ~1 C) @+ g9 i- ^5 G
5 }2 q& O$ }) U& C1 P! M5 u; z体外生长的细胞对微生物及一些有害有毒物质没有抵抗能力，因此培养基应达到无化学物质污染、无微生物污染（如细菌、真菌、支原体、病毒等）、无其他对细胞产生损伤作用的生物活性物质污染（如抗体、补体）。对于天然培养基，污染主要来源于取材过程及生物材料本身，应当严格选材，严格操作。对于合成培养基，污染主要来源于配制过程，配制所用的水，器皿应十分洁净，配制后应严格过滤除菌。 # e. ~$ s) E) |% {1 N' Y: Y

1 a6 p- R) G  l( n2 k由于体外培养细胞自身没有抵抗污染的能力，而且培养基中的抗生素抗污染能力有限，因而培养细胞一旦发生污染多数将无法挽回。支原体污染后，因为它们不会使细胞死亡可以与细胞长期共存，培养基一般不发生浑浊，细胞无明显变化，外观上给人以正常感觉，实则细胞手到多方面潜在影响，如引起细胞变形，影响DNA合成，抑制细胞生长等。 $ ]* m4 a4 F3 O" o; }9 N
. M& w3 y) K( a9 e6 o6 o( y
组织细胞培养工作中，可以从以下几方面来预防支原体的污染：控制环境污染；严格实验操作；细胞培养基和器材要保证无菌；在细胞培养基冲加入适量的抗生素。 / ~4 E* b3 T" B8 Z

8 ?( n! ^; h, H8 [; U0 D4 f抗生素主要用于消毒培养液，是培养过程中预防微生物污染的重要手段，也是微生物污染不严重时的“急救”方法。不同抗生素杀灭微生物不同，应根据需要选择。 1 q3 y4 R5 k3 y1 p9 n/ a! K

$ @+ N$ p& H: _$ _* r8 w在细胞培养过程中如果发现破碎的细胞甚多，培养细胞需要频繁改善营养环境才能支持长期传代培养时，应该怀疑支原体污染。支原体污染难以观察特殊的外观变化，培养液也不浑浊。 ; E9 a1 ?+ G' r$ S) H

' t( Z3 @9 v8 J3 C; K8 s  P( i支原体污染细胞后，特别是重要的细胞株，有必要清除支原体，常用方法有：抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。要注意的是：支原体没有细胞壁，故作用于细胞壁生物合成的抗生素，如内酰胺类、万古霉素等是不敏感的；对多粘菌素、利福平、磺胺药物普遍耐火药。对支原体最有抑制活性抗生素是四环素类、大环内酯类等，氨基糖苷类、氯霉素对支原体有较小的抑制作用。必要时更换所有培养用物。通常，滤过除菌的方法对支原体是没有作用的。 $ g! G7 Z4 ^+ V

6 c% a- ^6 l4 g由于一些微生物，如支原体，病毒等能通过滤膜，所以过滤药品仍潜在被外源微生物污染的危险，近年来，60Co辐射灭菌技术在医药、食品等领域广泛应用，由于辐射灭菌能够彻底杀灭所有微生物。有试验证实以2Mrad辐射处理的各培养基样品达到了无菌要求，经多批培养试验，辐射灭菌安全可靠；辐射灭菌的培养基营养性能不低于过滤组，证明辐射灭菌对培养基性能无不良影响；对血清的辐射灭菌试验效果也表明60COγ射线不影响培养效果。把干粉培养基经无菌操做定量分装于灭菌容器内，辐射后以干粉原型贮藏，不但培养基的纯净性得到保障，而且营养性能较过滤后以水溶液形式保存更稳定，对谷氨酰胺等这类水溶液不稳定者特别合适。
% B7 N9 k' O3 s3 n; h6 A6 x1 |, V- e
目前，有专门做支原体检测的试剂盒，可以用细胞滴片检测。市场上已有了新一代支原体抗生素M-Plasmocin（InvivoGen公司），能有效的杀灭支原体，又不影响细胞本身的代谢，而且处理过的细胞不会重新感染支原体。另外，配合支原体检测试剂盒（市场上有售，如美国ICN公司的产品），可以帮助尽快发现支原体的污染。: ?5 W& ?* t, N- B7 L$ Z- Z8 `

---

作者: kephort    时间: 2012-10-18 08:06

这么好的文章，怎能不顶不收藏？！

---

作者: 昕昕    时间: 2015-5-26 08:54

想都不想，就支持一下  

---

作者: aakkaa    时间: 2015-6-16 18:09

好啊，谢楼主

---

作者: tuanzi    时间: 2015-6-28 17:08

谢谢楼主啊！

---

作者: sky蓝    时间: 2015-8-12 19:05

我也来顶一下..  

---

作者: immail    时间: 2015-8-22 19:53

希望可以用些时间了~````  

---

作者: 龙水生    时间: 2015-8-29 19:52

我毫不犹豫地把楼主的这个帖子收藏了  

---

作者: laoli1999    时间: 2015-10-14 15:10

一个人最大的破产是绝望，最大的资产是希望。  

---

作者: 泡泡鱼    时间: 2016-1-19 11:18

初来乍到，请多多关照。。。  

---

作者: laoli1999    时间: 2016-1-22 15:27

围观来了哦  

---

作者: 兔兔    时间: 2016-2-4 22:12

青春就像卫生纸。看着挺多的，用着用着就不够了。  

---

作者: marysyq    时间: 2016-2-9 10:19

厉害！强~~~~没的说了！  

---

作者: chongchong    时间: 2016-2-12 09:57

回复一下  

---

作者: chinagalaxy    时间: 2016-2-12 16:17

呵呵 哪天得看看 `~~~~  

---

作者: aliyun    时间: 2016-2-22 10:35

鉴定完毕.!  

---

作者: doc2005    时间: 2016-3-23 08:35

dc-cik nk  

---

作者: apple0    时间: 2016-4-8 19:08

干细胞从业人员  

---

作者: chinagalaxy    时间: 2016-4-9 15:35

免疫细胞疗法治疗肿瘤有效  

---

作者: 墨玉    时间: 2016-4-28 12:36

真是天底下好事多多  

---

作者: 生科院    时间: 2016-5-3 09:44

细胞治疗行业  

---

作者: 蝶澈    时间: 2016-5-21 10:11

围观来了哦  

---

作者: ines    时间: 2016-5-26 11:11

干细胞研究重在基础

---

作者: 命运的宠儿    时间: 2016-6-28 13:54

淋巴细胞

---

作者: 再来一天    时间: 2016-7-2 11:53

有才的不在少数啊  

---

作者: 命运的宠儿    时间: 2016-7-18 10:53

生殖干细胞

---

作者: 王者之道    时间: 2016-7-26 17:10

感觉好像在哪里看过了，汗~  

---

作者: nosoho    时间: 2016-7-27 21:10

心脏干细胞

---

作者: 黄山    时间: 2016-8-11 15:01

加油啊！偶一定会追随你左右，偶坚定此贴必然会起到抛砖引玉的作用~  

---

作者: xm19    时间: 2016-9-30 15:43

文笔流畅，修辞得体，深得魏晋诸朝遗风，更将唐风宋骨发扬得入木三分，能在有生之年看见楼主的这个帖子。实在是我三生之幸啊。  

---

作者: 我心飞翔    时间: 2016-10-23 09:10

水至清则无鱼,人至贱则无敌!  

---

作者: 三好学生    时间: 2016-10-24 15:42

慢慢来，呵呵  

---

作者: dypnr    时间: 2016-11-8 17:28

呵呵 大家好奇嘛 来观看下~~~~  

---

作者: happyboy    时间: 2016-12-21 16:42

继续查找干细胞研究资料

---

作者: 知足常乐    时间: 2017-1-10 15:42

不错不错.,..我喜欢  

---

作者: awen    时间: 2017-1-19 20:32

干细胞研究还要面向临床

---

作者: yunshu    时间: 2017-1-20 19:00

干细胞库  

---

作者: 求索迷茫    时间: 2017-1-21 17:35

貌似我真的很笨????哎  

---

作者: 小丑的哭泣    时间: 2017-2-9 02:23

干细胞从业人员  

---

作者: 考拉    时间: 2017-2-12 13:10

加油啊！！！！顶哦!!!!!  

---

作者: sshang    时间: 2017-2-14 02:58

干细胞行业门户 干细胞之家

---

作者: syt7000    时间: 2017-3-7 05:24

赚点分不容易啊  

---

作者: 陈晴    时间: 2017-3-8 18:21

初来乍到，请多多关照。。。  

---

作者: 小丑的哭泣    时间: 2017-3-10 16:18

每天早上起床都要看一遍“福布斯”富翁排行榜，如果上面没有我的名字，我就去上班……  

---

作者: 温暖暖    时间: 2017-3-15 09:54

照你这么说真的有道理哦 呵呵 不进沙子馁~~~  

---

作者: cjms    时间: 2017-3-25 11:54

任何的限制，都是从自己的内心开始的。  

---

作者: Greatjob    时间: 2017-4-1 10:54

先看看怎么样！  

---

作者: 123456zsz    时间: 2017-4-11 10:30

谢谢分享了!  

---

作者: mk990    时间: 2017-4-30 17:43

活着，以死的姿态……  

---

作者: 旅美学者    时间: 2017-5-10 13:35

不错，支持下  

---

作者: xm19    时间: 2017-5-16 03:32

不错，感谢楼主

---

作者: tempo    时间: 2017-5-17 21:17

干细胞之家 我永远支持

---

作者: 水木清华    时间: 2017-6-10 13:53

加油啊！偶一定会追随你左右，偶坚定此贴必然会起到抛砖引玉的作用~  

---

作者: 生科院    时间: 2017-7-19 15:16

支持你一下下。。  

---

作者: pspvp    时间: 2017-8-19 16:01

我的妈呀，爱死你了  

---

作者: apple0    时间: 2017-9-9 12:00

好啊，谢楼主

---

作者: 生科院    时间: 2017-9-11 00:21

顶你一下，好贴要顶！  

---

作者: apple0    时间: 2017-9-21 23:54

站个位在说  

---

作者: 20130827    时间: 2017-9-27 16:42

厉害！强~~~~没的说了！  

---

作者: wq90    时间: 2017-10-11 05:33

慢慢来，呵呵  

---

作者: 3344555    时间: 2017-10-14 12:26

干细胞分化技术

---

作者: marysyq    时间: 2017-10-30 14:35

我起来了 哈哈 刚才迷了会  

---

作者: ikiss    时间: 2017-11-1 04:04

慢慢来，呵呵  

---

作者: mk990    时间: 2017-11-25 11:53

鉴定完毕.!  

---

作者: wq90    时间: 2017-11-26 09:35

干细胞与基因技术

---

作者: 王者之道    时间: 2017-11-27 11:58

干细胞分化技术

---

作者: 修复者    时间: 2017-12-9 12:27

发贴看看自己积分  

---

作者: DAIMAND    时间: 2017-12-9 17:07

就为赚分嘛  

---

作者: wq90    时间: 2017-12-29 00:22

不错的东西  持续关注  

---

作者: xuguofeng    时间: 2018-1-9 09:27

楼上的话等于没说~~~  

---

作者: nauticus    时间: 2018-1-28 03:28

世界上那些最容易的事情中，拖延时间最不费力。  

---

作者: ines    时间: 2018-2-11 20:32

干细胞产业是朝阳产业

---

作者: 甘泉    时间: 2018-2-28 11:10

不错，看看。  

---

作者: SCISCI    时间: 2018-4-3 09:54

真是佩服得六体投地啊  

---

作者: alwaysniu    时间: 2018-4-29 05:08

端粒酶研究

---

作者: yunshu    时间: 2018-5-2 07:59

真是佩服得六体投地啊  

---

作者: 科研人    时间: 2018-5-18 02:45

我想要`~  

---

作者: 生物小菜鸟    时间: 2018-5-26 18:00

努力~~各位。。。  

---

作者: awen    时间: 2018-6-2 19:54

回答了那么多，没有加分了，郁闷。。  

---

作者: feixue66    时间: 2018-6-8 10:31

一定要回贴，因为我是文明人哦  

---

作者: lalala    时间: 2018-7-5 12:19

谁能送我几分啊  

---

作者: qibaobao    时间: 2018-10-11 15:07

干细胞之家

---

作者: 与你同行    时间: 2018-11-9 07:30

谁能送我几分啊  

---

作者: 泡泡鱼    时间: 2018-11-10 22:00

顶一个先  

---

作者: hmhy    时间: 2018-11-11 07:26

不是吧  

---

作者: 天蓝色    时间: 2018-12-6 13:10

干细胞行业门户 干细胞之家

---

作者: biodj    时间: 2018-12-19 21:17

努力,努力,再努力!!!!!!!!!!!  

---

作者: htc728    时间: 2019-1-2 02:31

不看白不看，看也不白看  

---

作者: apple0    时间: 2019-1-4 17:01

干细胞之家 我永远支持

---

作者: HongHong    时间: 2019-1-5 16:01

干细胞研究还要面向临床

---

作者: ladybird    时间: 2019-1-19 23:35

不管你信不信，反正我信  

---

作者: 三星    时间: 2019-1-31 05:20

几头雾水…  

---

作者: nauticus    时间: 2019-2-14 09:10

好人一个  

---

作者: 多来咪    时间: 2019-2-14 17:43

我来了~~~~~~~~~ 闪人~~~~~~~~~~~~~~~~  

---

作者: Whole    时间: 2019-2-16 19:54

一定要回贴，因为我是文明人哦  

---

作者: dada    时间: 2019-3-4 09:43

干细胞与基因技术

---

作者: ines    时间: 2019-4-13 22:42

快毕业了 希望有个好工作 干细胞还是不错的方向

---

作者: nauticus    时间: 2019-4-22 18:13

谁都不容易啊 ~~  

---

作者: 加菲猫    时间: 2019-4-24 01:56

帮你项项吧  

---

作者: bioprotein    时间: 2019-5-9 08:37

朕要休息了..............  

---

欢迎光临 干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)

Powered by Discuz! X1.5