干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 无血清培养肿瘤干细胞，细胞很容易aggregation，请问怎样处理 [打印本页]
作者: wy200616    时间: 2013-3-4 15:12     标题: 无血清培养肿瘤干细胞，细胞很容易aggregation，请问怎样处理

我用无血清培养基，加生长因子培养肿瘤干细胞，corning公司的低吸附瓶，但是细胞容易aggregation，该怎样处理呢？谢谢了！
作者: 硕果累累_555    时间: 2013-3-4 16:16

肿瘤干细胞就是悬浮培养的啊，通常都会聚团成长的。
作者: qq348940434    时间: 2013-3-5 13:36

是不是细胞因子浓度问题，我到现在都没把干细胞给养出来。" h) d& a& x: p/ n5 {+ |
  还有就是 你那个corning公司的吸附板是用的那个3471的六孔板么？
作者: 570505    时间: 2013-3-5 20:44

回复 wy200616 的帖子3 i" F3 c! v6 Y; T/ d7 G6 q
. Y; ]7 b' k" T) F, g
aggregation是悬浮培养中经常遇到的问题。是肿瘤球培养的大忌。
" B1 V  b- X5 Q0 M) E* h% ^; ~下次你可以注意一下：一是细胞浓度不可过大，细胞过密容易聚集。% X7 E  `  L- z6 E
                    二是摇晃要适度，不可过于剧烈。5 v1 G" f5 L; u+ k0 B
                    三是你可以试试先贴壁培养，然后再用干细胞培养液刺激成球，这是防止聚集的重要方法。2 t* @. l1 a3 i) A  A' \

2 K  J6 l9 w5 ^) G$ C# o: B解答完毕。
作者: qq348940434    时间: 2013-3-6 09:24

回复 570505 的帖子3 j+ Q1 R! i6 v; B' s" m, [2 Q% L
7 J) T3 [% W; N( ~7 T! O
你所说的先贴壁培养，再用干细胞培养基养，我上学期也有试过，但是不知道为啥，也没养出来，养了5天左右就看见一瓶子的膜一样的东西飘着。。。
作者: 570505    时间: 2013-3-6 22:52

回复 qq348940434 的帖子
; z) q3 ?$ A8 A- W" Y: W, j& }/ n& J, `# `3 ~6 X1 r4 z
那应该是细胞有污染了
作者: mike19840320    时间: 2013-3-7 11:01

是细胞密度太大的问题，可以在96孔板中，使没孔1个或2个细胞，这样就不会发生细胞聚集。
作者: qq348940434    时间: 2013-3-7 11:23

回复 570505 的帖子; ~9 c+ o& H, N) d0 j6 K# k
9 F% H; r9 S/ _9 Z
没，这种绝对不是细胞污染的样子，应该是细胞浓度的问题，还有可能就是我生长因子的浓度高了，我是EGF和bFGF都是40ng/ml的浓度。
作者: qq348940434    时间: 2013-3-13 09:35

回复 570505 的帖子+ d+ F& C; @- }- p& R

: t9 h' A3 e0 e请教个问题，为啥我按你所说的第三种方法 里面直接加入无血清培养基（生长因子），然后过了1天，现在看起来都是浑浊的。
作者: xiaolong    时间: 2013-3-13 09:50

悬浮生长，能看到聚团的，很正常，就像单个微生物培养后生成菌落一样一样的
作者: qq348940434    时间: 2013-3-13 09:57

回复 xiaolong 的帖子3 z* B  d2 d1 {4 w- u
( z& i" R7 L$ G% M8 V# E8 i
不是。我现在养出来第二天就感觉是培养基变浑浊了的样子。
作者: wy200616    时间: 2013-3-13 16:37

回复 qq348940434 的帖子
8 ~4 m' T. @" [* m% d! @# {
/ e6 X6 k; Z0 {& B, G  o. }' T我用的是3814培养瓶
作者: wy200616    时间: 2013-3-13 16:39

回复 570505 的帖子
6 E0 _% n3 q: p  n5 D) j7 \) s) a
- U& }0 _8 X! u0 z' i* K  W谢谢你了！我因为需要大量细胞做其他实验，所以细胞浓度太大，因为怕聚集，所以摇晃很厉害，结果适得其反啊！4 u* j, b! f9 a6 }# c1 e  J
作者: wy200616    时间: 2013-3-13 16:40

回复 qq348940434 的帖子+ @# s2 b# n0 ^+ q0 n

* F; j! B- h2 k" f上面漂了一层可能是死细胞碎片
作者: qq348940434    时间: 2013-3-14 09:10

回复 wy200616 的帖子" B( @& a# Q8 ?, n% p3 {

0 n' \, Q( x, z& f: R感觉是不是用少量的化疗药物也能把干细胞给养出来呢。* Q6 j: l3 J& l5 A' u. M" k
   只是还不知道用哪一类的化疗药和剂量。
作者: zarbitter    时间: 2014-2-24 21:03

570505 发表于 2013-3-5 20:44
: F7 _- I1 n% k! J. q回复 wy200616 的帖子
& C# Z. @2 F, `: H: i
, z: `; s7 J# A$ Y/ saggregation是悬浮培养中经常遇到的问题。是肿瘤球培养的大忌。
* B- j9 y- @1 `" K
你好，我做了好几次肿瘤干细胞的成球试验了，一直 没成功，这次竟然还贴壁。我先给问问你说的第三步是怎么做的？干细胞培养基刺激成球？？
作者: zarbitter    时间: 2014-2-24 21:04

zarbitter 发表于 2014-2-24 21:03
# S8 [+ k8 J. Y7 l# a- v你好，我做了好几次肿瘤干细胞的成球试验了，一直 没成功，这次竟然还贴壁。我先给问问你说的第三步是怎么 ...
1 G. B; M6 p& b3 T" N1 f
打错字了，“我先给问问你说的第三步”是我想问问。。不好意思
作者: sxltc    时间: 2014-3-25 14:36

回复 zarbitter 的帖子
' w) B; ~) e5 `' W( k
# j, m5 \% `# x: B, Y. U朋友，你的干细胞养的怎么样了？
作者: zarbitter    时间: 2014-4-24 21:30

回复 sxltc 的帖子
3 o, @- v& Z9 h- U1 S4 N$ U& @7 F6 R) \1 S% A2 ^, b4 B7 j7 X
不行啊。。我要疯了！！
作者: KINGxuridongshe    时间: 2014-5-27 00:24

回复 wy200616 的帖子
* w2 H2 n: e! S3 ]6 d* f2 l
1 {' E! V) L2 Q. d% C你好，请问你现在养的sphere怎么样了？还是会发生聚集吗？我最近也在进行这方面的工作，但是老是细胞发生聚集，请你指教！
作者: 细胞海洋    时间: 2014-5-27 07:54

回复 KINGxuridongshe 的帖子- [3 b4 Y5 B  H6 `5 \* p6 W4 m
! [" r5 G' j$ y, `' H  O' q- b
建议你发新帖提问
作者: 小人歌志    时间: 2014-6-4 21:55

回复 570505 的帖子
/ x1 I6 M4 y( w) ^1 q0 x0 x) c1 ?3 P
培养时要不停的摇晃么？求问你这里的摇晃是什么意思啊？- q& h& |* e' X5 Z5 A$ c3 V2 n
作者: 细胞海洋    时间: 2014-6-5 08:36

回复 小人歌志 的帖子
6 {+ v  N+ S5 N! ^; |& ]
: d  {! H* o/ u/ w0 |8 d建议你发新帖提问



欢迎光临 干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/) Powered by Discuz! X1.5