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标题: CRISPR/cas9系统中gRNA的设计 [打印本页]

作者: runsong 时间: 2013-6-16 15:06 标题: CRISPR/cas9系统中gRNA的设计

CRISPR/cas9系统中gRNA怎么设计啊
我找的文献说得都不具体
有没有详细一点的步骤？

图片附件: QQ图片20130616150835.jpg (2013-6-16 15:05, 57.36 KB) / 下载次数 707
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=NTI3Mzl8Mzc4ZDY4ODZ8MTcxNjM1NTczMXww

作者: chips100 时间: 2013-6-17 09:58

参见addgene，说的还算详细。
另，能惠赠 CRISPR/cas9系统质粒吗

作者: chips100 时间: 2013-6-17 10:01

http://www.addgene.org/CRISPR/% o/ ]( J9 E. I5 {6 c" }. `
直接给链接，貌似zhang的比较好

作者: quanri1126 时间: 2013-6-18 12:22

根据zhang的site http://crispr.genome-engineering.org/ 选就行了/ |' A/ j8 ~+ Y8 B, }# P0 ^
exon上的位置 GNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NGG 中间20个随机碱基 G+19个N 可以选作一个target 最后的NGG是PAM site / Z6 h+ U- H. z+ m: O# g7 B
再有根据不同的plasmid 可能长度不同我买的zhang的plasmid 刚开始做有问题一起讨论吧

作者: chips100 时间: 2013-6-18 13:26

quanri1126：求惠赠质粒

作者: quanri1126 时间: 2013-6-19 15:37

回复 chips100 的帖子

我不在中国，而且从addgene 买也很便宜运费加上质粒不到1000块钱

作者: cywjswsky 时间: 2014-5-16 09:07

回复 quanri1126 的帖子- r9 N4 m3 @8 K" M" ^) u1 @5 `
+ A$ X$ [; d, v' `
求详细构建之过程

作者: milanello11 时间: 2014-6-11 14:39

回复一下

作者: 小桥流水 时间: 2015-7-8 21:34

回复 quanri1126 的帖子
! R" n |/ y/ {( v* X1 n7 d G' D/ [
我想问一下，为什么中间是19个碱基呢，如果21个会怎样

作者: 小桥流水 时间: 2015-7-8 21:39

回复 quanri1126 的帖子( U' b3 Y9 ^' a% t: k
- H0 [9 w6 H% d% _+ E9 n- g* M
你好，我想请教一下，在cas9中，设计gRNA引物时,用T7启动子，为什么要求靶标序列满足GGN19GG的条件，，还有为什么中间一定要求是19个碱基，如果不是19个会怎样，，还有如果我的基因里面找不到满足这样条件的序列，那该怎么办呢，跪谢，赐教！谢谢！

作者: 细胞海洋 时间: 2015-7-9 08:05

回复小桥流水的帖子. _4 C5 [0 N% ^3 m
/ [& a( C$ K& P% q) E
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作者: 吴大炮 时间: 2015-10-31 10:51

我用张峰的网站来设计gRNA，我用的是外显子，请问这个选项该选什么呢？sequence type：1，other region (23-500 nt)；2，unique genomic region (23-500 nt)请赐教哦

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