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标题: 如何选择恰当的细胞分选柱 [打印本页]

作者: miltenyi 时间: 2013-8-23 17:44 标题: 如何选择恰当的细胞分选柱

本帖最后由 miltenyi 于 2013-8-23 17:45 编辑 / P2 J4 c, P& X. o8 N$ ?. W. j7 \( P

美天旎的分选柱分几类，如MS、LS、LD级autoMACS column 等，那么，这些有什么区别呢，您在实验中又该如何去选择适合您的分选柱呢？

首先，让我们来认识一下分选柱：

美天旎的分选柱（Column）是MACS技术的核心，其特点如下：$ }' D0 f9 n1 m& a

填充有不同规格的铁珠，可分选或者去除10^7-10^10细胞；) }) [9 \) q) ~1 z7 I! G
表面亲水包被，不损伤细胞，同时保证流速；- i5 y. ?+ l. y# f* A, @% o
可以将磁场放大1000-10000倍，因此只需极少的细胞表位被识别即可被磁场捕获，从而为后续实验预留足够抗原表位，如磁珠分选后的细胞无需切除磁珠即可直接染流式抗体，而不受影响。
/ Z {( w* H5 S" u" ]9 X

我们知道，美天旎的MACS分选策略有阳性分选、去除分选，那我们就按两种分选策略来分析如何选择恰当的分选柱：: s) w; o0 `7 n' \4 e5 `  }: T3 G
9 s. C3 ]* V( Q$ G
一、阳性分选) D* W5 H2 {0 [/ z
1、要分选的细胞数量：
. `$ U  B/ S* R8 [. \+ E( h* \
如下图所示：MS柱容纳的最大细胞上样量是2×10^8细胞（既包含阳性细胞又包含阴性细胞），而其能捕获的阳性细胞最多是10^7。! [: B, q4 o- q1 k

如何选择恰当的细胞分选柱. u. o+ e8 F$ C5 F* O) O
[attach]54881[/attach]9 Y" X# y8 ?( O% q4 f
4 E8 Q! i4 A9 R2 k; K5 C
2、目的细胞是常见细胞还是稀有细胞. {: M9 ]5 u7 j- x% {; |5 k, |* b/ u

为了在分选稀有细胞（表达频率〈5%）时得到较更高的纯度，您可以使用两个分选柱：用一根分选柱进行一次分选后，阳性成份再过一次新的分选柱。
$ [6 W/ I" j' w6 L5 t; A
3、大体积的细胞
4 e" g' B+ e8 n. f7 k
另外，如果您要分选的目的细胞是体积较大的特殊细胞，如原生动物细胞、人皮肤郎罕式细胞、鼻咽癌细胞、心肌细胞等，那推荐您使用Large cell column。因为大细胞柱的铁珠间隙足够大，容许这些特殊的大体积细胞顺利通过。- y: d1 x0 O7 Y6 ]; o8 b( p9 s6 A7 w
) a* N9 u- M& T
二、去除分选
" S3 A: {4 h$ X1 E2 e1 o- {
去除分选中需要考虑以下几个因素：: X$ X6 [1 \5 e  j$ e' [7 \# [/ l

1 您使用MACS isolation kits 或MACS microbeads吗？
5 z4 n: R: y  Y* C+ N' s
2 抗原表达强还是弱呢？
0 ~5 ]  h6 k% P, {1 c9 {1 J
3 您需要更高的纯度还是回收率呢？1 {. e1 R; i$ T8 X" M

4 您需要分选多少细胞？1 T% J7 k$ ~4 r
7 B8 Z& |: R2 y! A. g) J6 y- W
根据这几个因素，您可以按下图的标识来选择合适的去除分选柱。
[attach]54882[/attach]
5 O  m' R7 p+ M
: F0 }1 Z+ L9 b
以上，您知道如何选择分选柱了吗？
7 a5 J% `3 k# M9 e8 {) h
如有疑问，您可以拨打800-820-2606. h& T' }9 L8 S/ J% ?0 v

或者发邮件macs@miltenyibiotec.com.cn 咨询。

作者: yuanshenyewu 时间: 2013-8-30 14:58

MS用的还是多一点

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