干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 请教一下293 T细胞的培养问题？？ [打印本页]

作者: 亮亮燕燕 时间: 2013-11-25 09:07 标题: 请教一下293 T细胞的培养问题？？

最近培养的293T细胞，发现细胞中有黑色沉积物，是什么东西呢？会不会是细胞传代次数高了的缘故！

作者: lipd09@mails 时间: 2013-11-25 11:07

回复亮亮燕燕的帖子* Y* z. K! j& n* ]9 j1 I2 c
. f/ ^* U0 ~! A( X* a
我最近也在培养293T细胞，在没有加质粒之前，细胞密度较低时，镜下也能看见一些黑色的点点，但当细胞密度高时就没有。我认为您先确定是否为菌污染（培养293T细胞不可以加抗生素，可能容易发生污染）。如果不是，应该不会有太大问题。加了质粒后，镜下就能看见细胞有许多黑点，我想这是质粒包装的病毒吧。

作者: yaolinzhang 时间: 2013-11-25 14:03

回复亮亮燕燕的帖子. u9 U7 x. F" {; m' W. M2 g u9 Y

应该是代谢产物，楼主的细胞估计代次有点高了

作者: 漫步云端0511 时间: 2013-11-25 14:17

可能是细胞碎片，也可能是污染。做下hochest染色，荧光显微镜下观察看是否污染。

作者: dallashine 时间: 2013-11-26 11:25

首先确定黑色颗粒物是在细胞中，还是浮于细胞表面。, @$ |& Q C) M" X- ?
若在细胞内就应该是细胞状态差的表现，有可能是传代过多，也可能是细胞培养条件差（如，血清质量差、培养基pH异常、消化过程有问题等）造成的。8 U! } z5 ^' l' ?
若在细胞外应观察细胞悬液中是否也有颗粒物，可能就是污染了或细胞代谢严重异常，建议弃掉。

作者: 亮亮燕燕 时间: 2013-11-26 12:14

多谢大家了，我用的血清是GB的，培养液也会买的现成的。我也觉得可能是传代多了。细胞状态不太好了！

作者: SSRSQ 时间: 2013-11-27 21:14

我以前养也会看到一些黑色的点点，那些不是污染，应该是细胞生长状态不是很好（纯个人推测），不过没有影响后面病毒的包装。

作者: 孤野知—少帅 时间: 2013-11-28 09:57

细胞状态不好不一定表现为是否有黑点，我养293T时也出现过黑点，第一次出现时我猜测是皿底或皿盖印迹，后来传代换了皿发现有时有，有时又没有了，但是293T的状态挺不错的。而我养其他细胞（猪的成纤维细胞）用同样的培养基也有出现小黑点，但是从培养基来看应该不是污染，而且细胞状态也还不错，所以我推断可能是细胞代谢产物吧

作者: syacr 时间: 2013-11-28 10:06

我之前也遇到过这种情况。观察下这些黑色颗粒是否运动，如果是在做布朗运动，可能是染菌了，但是发现及时，把细胞状态调整好是没有太大的影响的。8 C% s8 l5 {, R( g( V/ u3 F+ i
我之前还特意查了这种颗粒，这些颗粒做布朗运动，通过胞吞作用进入细胞，在细胞内侵染细胞，此时的细胞会出现很多空泡，最终是细胞像蜂巢一样全都是空泡。然后细胞死亡，大量复制后的黑色颗粒离开死细胞，做布朗运动，找下一个细胞。1 m& A8 q1 m) ]
一般这种颗粒有2种解释，有的说是黑胶虫，有的说是支原体。我之前遇到后，买了支原体清洁剂，发现有明显改善。, |5 n& s; L" z
希望对你有帮助。

作者: 亮亮燕燕 时间: 2013-11-30 10:23

回复 syacr 的帖子

实在是太感谢了，我最近也发现有些细胞里开始有空泡了，难道我的细胞也是支原体污染了吗？这可就麻烦了。我考虑重新换一批细胞了。

作者: syacr 时间: 2013-11-30 18:49

回复亮亮燕燕的帖子
- x' J. ^8 ^% W2 F, a- D( _
客气客气

作者: wf78365421 时间: 2013-12-4 13:19

我之前也遇到过这种情况。
有可能是支原体污染。% C+ k' B! W# e4 B6 L
可购买支原体清洁剂，试一下。

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)