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标题: 求鉴定-诱导分化成脂肪细胞和油红O染色照片 [打印本页]

作者: myylovewp 时间: 2014-4-17 14:26 标题: 求鉴定-诱导分化成脂肪细胞和油红O染色照片

最近刚接触干细胞的诱导分化，用的Gibco的试剂盒。诱导成脂肪细胞20天细胞内左右出现类似油滴的亮点（图一），油红O染色后没有上色。改变染色方法后（没有用60%异丙醇漂洗，仅用水洗），背景没洗干净。可是很少细胞内出现图二的红色，没洗干净的那些杂质是什么？怎样才能除去。求大家帮我鉴定一下，万分感谢！

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作者: jane1lee 时间: 2014-4-17 16:47

油红是自己配的吗，最好过滤下

作者: 刘慧瑾 时间: 2014-4-18 08:16

挺好的，继续努力

作者: myylovewp 时间: 2014-4-18 08:35

回复 jane1lee 的帖子( Y: g9 k, R. a k* @# t5 w
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油红O是自己配的。0.5g油红溶于100ml异丙醇里，滤纸过滤保存在4度冰箱。染液用6ml的油红O+4ml水，过滤后静置10min才用的。0 R. Z& v1 ]+ i' K' e0 K9 t
我想请教一下您染色完您是怎么漂洗的？用水还是60%的异丙醇？

作者: myylovewp 时间: 2014-4-18 08:52

回复刘慧瑾的帖子1 Z+ K2 v) O9 n- Z

请教您一下，我图片一里的是油滴吗？怎么染色后细胞外红红的杂质是什么？

作者: huangcong1988 时间: 2014-4-19 10:31

木有成功

作者: 沙漠狐o0 时间: 2014-4-21 10:34

重新做一次吧，杂质是油红O颗粒，过滤的时候多加层滤纸试一下。# \& l- l+ m, G% B+ [2 p D

作者: myylovewp 时间: 2014-4-21 11:03

回复沙漠狐o0 的帖子/ `0 G7 W0 L7 e. T5 n2 E2 U
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谢谢您的解答，我是用单层滤纸过滤后，再用0.22um的过滤器过滤染液的。下次试试多层滤纸过滤

作者: myylovewp 时间: 2014-4-21 11:06

回复 huangcong1988 的帖子* ^! k3 E. B) L: l
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谢谢，我再诱导一次试试。

作者: luyue6453 时间: 2014-5-31 10:16

回复 myylovewp 的帖子
# [: B. x8 X8 h. y3 Y
我现在才开始做诱导实验，不知道您的成功没，你出现的问题解决没？

作者: 1824368 时间: 2014-6-2 08:59

加油加油

作者: 雁南飞 时间: 2014-6-4 14:35

染色时间再长一点，30分钟，滤纸吸去染液就可以了，染色后不用再洗，试试。

作者: myylovewp 时间: 2014-6-5 10:29

回复 luyue6453 的帖子& Y$ ?& W( |% y
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我买了几个专门过滤有机物的滤头过滤油红，杂质就没有了。有的细胞很好诱导，4-6d就能看到结果，比如脐带源MSC，有的就很难诱导。

作者: luyue6453 时间: 2014-6-5 11:52

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细胞长到什么情况的时候可以开始诱导了？我现在养了8天了，

作者: myylovewp 时间: 2014-6-6 11:09

回复 luyue6453 的帖子% U' L' `+ ^* _% w1 `# Z

我们一般在细胞融合度达70-80%的时候加入诱导液，大约一周就能看到油滴出现。

作者: suning5 时间: 2014-6-11 10:55

制备Oil Red O：将0.15g的Oil Red O溶解于50ml异丙酮中，制成0.3%(w/v)的贮存浓度，室温保存。使用时用去离子水稀释成0.18%使用。

作者: myylovewp 时间: 2014-6-19 11:25

回复 suning5 的帖子) G3 h% M+ @: C* g; y& _& |

谢谢

作者: 穿裙子的猫 时间: 2014-9-28 09:13

我想问一下，你的这个试剂盒有配方吗

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