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标题:
无饲养层培养干细胞
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作者:
flyjing
时间:
2014-6-20 13:35
标题:
无饲养层培养干细胞
各位大虾，我马上要无饲养层培养小鼠胚胎干细胞，不确定培养基用什么，各位大虾有知道的吗或在培养的吗?不胜感激
作者:
defu
时间:
2014-6-20 14:02
条件培养基
作者:
plainxie192
时间:
2014-6-20 14:50
2i/LIF体系可以的。
作者:
孙帅帅
时间:
2014-6-20 15:17
E8就行吧~~
作者:
michaelgibh
时间:
2014-6-21 09:53
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孙帅帅
的帖子
9 G8 i, ~; |' l
7 P( P9 d' w6 o1 L! A& l& M# \" Z
E8不是用来养人得干细胞吗，养鼠的也可以？
作者:
碧螺春的秋天
时间:
2014-6-21 12:16
N2B27 2i/lif
作者:
zm19900508
时间:
2014-6-21 14:17
2i(50ml) avoid light
5 F& j& i) g S9 T" m: w! ^0 e
DMEM/F12 24ml
3 f8 @- u/ U, U9 I) ?9 k( ^
Neuronbasal 24ml
+ L+ S* c1 n3 P: _3 S$ _4 M
L-glutamine 100*
) y/ r4 o" p$ V5 q8 `) `# L
NEAA 100*
6 f" I* f6 X$ K6 ]( M: T5 j
sodium pyruvate 100*
. b5 D: {+ k, N; G8 r
penicillin/streptomycin 200*
7 {" U: ^$ o2 c+ l' a
2-mercaptoethanol 92ul
/ Q9 i1 a8 V: W" f( a- T* x! y
N2 250ul
i1 T9 P+ G4 Q( c3 y
B27 500ul
3 B$ Q' L. A! N
PD 25ul
+ r% j, c! |; [* X: X# {
CHIR 25ul
# ^8 m7 a' X. B, Q+ P
1000 units/ml lif 5ul
3 @$ m% [* v y: X* R1 S4 ?
状态很好
作者:
sszxlijin
时间:
2014-6-24 02:35
DMEM（高糖）
6 a W- i y Z4 ^/ x) s
FBS
8 {4 b7 ]& {& s4 M S
L-glutamine
( s) V* ]! M" h$ l6 C
NEAA
+ M$ S* c& X% J- ~2 r
penicillin/streptomycin
1 V6 {# y6 p9 C
2-mercaptoethanol
6 l9 H# r, d$ ^
1000 units/ml lif
8 K/ m( K* ^1 i
养在明胶包被板上，我养的是E14和R1 效果挺好的
作者:
kasaya
时间:
2014-6-26 08:53
再贡献一个
4 S/ x8 i7 v/ L
ES medium 100 ml
& V2 J6 }' e9 B" l( o& }/ V
DMEM (Specialty media, SLM-220-M) 80 ml
5 m) Q8 \' m d) }0 \0 \
FBS (Hyclone, SH30071.03) 15 ml
' y. H! _( g" Q" f* X1 r& G
Pen/Strep (100X, Specialty media, TMS-AB-2C) 1 ml （不加也行的，但是建系时要检测支原体）
6 v/ ?+ ?0 B9 g" x$ ?3 \+ {! {
L-glutamine (100X, Specialty media, TMS-002-C) 1 ml
% a; [% b6 O$ O; m8 Q
Nonessential amino acids (100X, Specialty media, TMS-001-C) 1 ml
2 l5 ]% Y5 [! |. j O9 t6 V8 y4 R
Nucleosides for ES cells (100X, Specialty media, ES-008-D) 1 ml
1 T* ^7 ?8 [5 ^5 c% U( H
2-mercaptoethanol (100X, Specialty media, ES-007-E) 1 ml
# Y7 e' D7 ^4 L& c6 k
LIF (ESGRO, GIBCO 13275-029) 10 μl
- s/ f/ A: t$ _4 r4 L% H
PD0325901 MEK inhibitor(10mM Stemgent, 04-0006) 10μl (1μM)
# |! n/ |2 F1 O1 Z5 X! z. {! A7 f
CHIR99021 GSK3βinhibitor(10mM Stemgent, 04-0004) 30μl (3μM)
8 P: ~" N9 C$ @8 B+ [
B J" n( z" q o ^1 Z
小鼠ES不用feeder也会长得很好的。如果不加2i也行，就是有些克隆容易分化。
作者:
flyjing
时间:
2014-8-26 14:03
谢谢各位，我要分离小鼠原代胚胎干细胞，不用饲养层，分离出囊胚之后，该用什么方法得到胚胎干细胞呢，不胜感激
作者:
细胞海洋
时间:
2014-8-26 14:25
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flyjing
的帖子
: w# m P3 {. B, i" ?6 @
: X: G" ^4 L( F9 S, ^$ K
你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
) w' I, h5 l) i6 O! T# K
" S2 D' n# M1 e# o7 V0 o4 ], p
否则他会看不到
6 q3 b1 v' A! k
作者:
flyjing
时间:
2014-10-18 15:37
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plainxie192
的帖子
' t* P9 _1 L, r7 {: E; l
) C% v7 F- G# J
你好，我想分离出小鼠囊胚之后，直接放在无饲养层培养基上培养几天，等长出ESC克隆后，再把ESC挑出，这样的话你说的这种培养基也可以吗？请问这种培养基你是在哪个公司买的？
作者:
flyjing
时间:
2014-10-18 15:43
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kasaya
的帖子
! g( S$ c( n) f
# `* N4 u [+ @) M
我在分离出小鼠囊胚之后，直接把囊胚放在无饲养层的胚胎干细胞培养基上培养，几天后把长出的ESC克隆挑出来，如果我这样做的话你说的这个配方能用吗，谢谢
作者:
细胞海洋
时间:
2014-10-20 09:39
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flyjing
的帖子
& f3 Q: e4 Z( q. z2 ^& W/ h9 r
1 z5 d3 k9 w4 g' P$ d* A9 B
建议你发新帖提问
作者:
宋红卫song
时间:
2014-10-20 09:54
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flyjing
的帖子
. f* h$ A: A* o4 t: h( W' {
G) i+ f l( q; C4 _
请问你用的是Oct4-GFP转基因小鼠吗？？
作者:
flyjing
时间:
2014-10-20 09:57
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宋红卫song
的帖子
5 Q5 e. ~2 V0 m4 h
, B$ I4 Y4 v- I( {- i. h
不是，我用的是一般的C57小鼠
作者:
宋红卫song
时间:
2014-10-21 09:37
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flyjing
的帖子
, W7 {4 T( h( |
) j$ G: G( o2 n, Z" C! o. ?
现在很多人都用OG鼠做了，可以看见带荧光的克隆哎
作者:
plainxie192
时间:
2014-10-23 10:28
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flyjing
的帖子
% E1 E* {9 m: H9 u1 k2 J- Z
# f8 v4 t1 t2 }. y/ g7 N6 F
可以的，培养基就是参照文献配制的的，前面有人写了配方的
作者:
guilaichen
时间:
2016-5-5 15:21
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sszxlijin
的帖子
! t7 X. z5 K$ D+ i$ j$ d6 v
+ b1 }- S! H5 F: T/ W8 o9 y
您好！我现在想养一下无feeder的mESCs，我可否问您要点细胞？您如果有需要的可以联系我，谢谢！！
作者:
sc-cxw
时间:
2019-3-19 17:01
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zm19900508
的帖子
5 O: x& z3 B1 x! H
' R$ h+ D3 Y. l" l9 f
请教一下从人囊胚期内细胞团开始培养建系，可以用您说的培养体系不?
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