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标题: 请教各位老师有关流式检测CIK细胞成熟程度 [打印本页]

作者: baby00000003 时间: 2015-2-2 15:23 标题: 请教各位老师有关流式检测CIK细胞成熟程度

CIK培养第六天，按照常规方法，2.5小时分离，加IFN-gamma，大约26小时加anti-CD3、IL-2、IL-1a，最长3天换液1/2，培养基变色立即换液，保持细胞密度不超过2*10^6/ml
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今天取细胞样本跑了个流式，但是CD3，CD56阳性率很低的说
下面是这次跑流式的图，
因为前辈遗留了一部分抗体，都是PE的，没法做双标，不过第一次实验，当作是趟地雷省着凑合用了' B2 ?$ z1 {1 \) _
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想请教各位老师，
有可能导致CD3、CD56阳性率低的原因？
有关FSC和SSC画门，像图上这样画是正确的画法么？$ ?1 W. `. k- T% H2 G
我觉得如果靠诱导单核细胞成熟而生成CD8，是不是应该像这样把单核和淋巴都画进去呢？3 U0 |. J/ N* {1 n. v" |# K
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作者: dollar007 时间: 2015-2-2 16:04

1确定下你的试剂有否过期；
2对照FS/SS分析图中，碎片和死细胞过多，设的门框了部分碎片和死细胞；可以通过调高FS域值屏蔽掉部分无关数据信号；% U2 x9 o! J/ B( X: I& F, l
3对照直方图中，单线门设的过右，就把它设定在右边锋和X轴交叉的地方，拖尾的部分可以容忍，一般对照不会出现，细胞养不好，制样差就易出现；/ a3 e' A: @3 Z' I7 i9 s
4然后再看看你的样本数据分析，是否双阳提拔起来了？

作者: baby00000003 时间: 2015-2-2 16:10

回复 dollar007 的帖子( F* E6 }" G% Y* b4 y+ L7 E9 G0 V
' ?( q5 Y, v+ B5 e% t
您说的门框内的死细胞和碎片指的是哪一部分呢？0 }( r; _4 ^9 }! G
是说70/70范围之内的都算么？1 R8 R, U2 q9 u2 h
我还以为最角落里的是碎片，临近角落的那一群是淋巴细胞......

作者: dollar007 时间: 2015-2-2 16:34

左下方的是碎片；目标细胞在你的图中靠下方一点；左边的是死细胞。

作者: dollar007 时间: 2015-2-2 16:43

你培养过程中，要更换培养瓶，这样贴壁细胞就去除了；分离后红细胞残留不多，在培养中不增殖，很快就会成为劣势群，比例不高。

作者: lyj-0017 时间: 2015-2-2 17:39

回复 baby00000003 的帖子; K- o( x# o ?* R

从你的同型对照来看，阈值可以设的再大点，去除更多无关信号，圈门没啥问题，CD3单阳结果还凑合，CD56单阳的结果我认为可能与你培养没多大关系，估计跟你的抗体有关。你用的CD56-PE是哪个公司的，克隆号是多少？是抗人CD56抗体吗？

作者: baby00000003 时间: 2015-2-3 08:08

回复 lyj-0017 的帖子# ~) F2 A* G. |) v

是BD的....555516,包装上说2016年才过期.......

作者: lyj-0017 时间: 2015-2-3 11:58

回复 baby00000003 的帖子6 P+ g# k0 ~1 |; l( B Q R* r# q

一般常用于检测人CD56的克隆号为NCAM16.2

作者: hyg5481655 时间: 2015-6-10 16:04

回复 dollar007 的帖子) C1 @7 w# J$ }1 d' F' J

请教，调高FSC阈值，比如到50，000左右，除去部分碎片和死细胞，圈中的CIK那一群细胞的比例大概有多少？

作者: 细胞海洋 时间: 2015-6-11 08:54

回复 hyg5481655 的帖子4 b/ D) F- w$ u) K) y

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