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标题: 干细胞感染病毒的问题 [打印本页]

作者: xiaoyuのhappy 时间: 2015-4-10 10:59 标题: 干细胞感染病毒的问题

请问一下用表达绿色荧光蛋白的病毒感染干细胞后，为什么会有很多细胞表达很弱的点状的荧光？是阳性还是假阳性？

作者: chiefcat 时间: 2015-4-19 18:56

你是在microscope下看到很弱的荧光嗎? 可以讓它們長多一點後去做Flow Cytometry確定一下喔~

作者: xiaoyuのhappy 时间: 2015-4-22 16:12

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! F$ |) k7 f- y5 y' D b( i- D
在显微镜下看是很多细胞上某些点有荧光，做流式的话阳性和阴性没有明显的分开，荧光由弱到强都有。是不是弱的荧光并不是真的表达了绿色荧光蛋白，而只是黏在细胞膜上？

作者: chiefcat 时间: 2015-4-25 22:53

本帖最后由 chiefcat 于 2015-4-25 22:54 编辑

"做流式的话阳性和阴性没有明显的分开" 是指沒有看見兩個不同的population嗎? : J& Y+ K/ w v/ O U. _
例如, 下圖明顯的有兩團cell, 左邊的是GFP-ve, 右邊的是GFP+ve,
你做流式的時候有看到類似的pattern嗎?' R# G. q7 Y) g2 K& \0 F# ~
4 `' r, x4 t( j
還有, 显微镜的laser強度會不會都調得太強? 那些弱荧光都有可能是noise

作者: xiaoyuのhappy 时间: 2015-4-29 22:23

回复 chiefcat 的帖子! e- n+ f6 @ @) u
) K; b7 N' [1 R1 p; e5 h
做流式没有上图那么明显的两团cell,与完全GFP阴性的细胞没有明显的界限

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