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标题: 请教：这个是我用无血清培养的MDA-MB-231，这个是球吗？用231富集可行吗？ [打印本页]

作者: hottodeath 时间: 2015-4-16 12:13 标题: 请教：这个是我用无血清培养的MDA-MB-231，这个是球吗？用231富集可行吗？

本帖最后由 hottodeath 于 2015-4-16 12:15 编辑 / q( ?5 W9 Z; ^ ~
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请教：这个是我用无血清培养的MDA-MB-231，这个是球吗？用231富集可行吗？

作者: daviddow 时间: 2015-4-17 11:38

首先，这个是phere.不过我用M7可以形成球，但是231不能形成球啊

作者: hcoohboy 时间: 2015-4-20 13:12

形态还可以，但我们实验室之前乳腺癌tumor sphere assay用的是MCF-7和ZR-75-1

作者: embryonic12 时间: 2015-4-21 10:15

这个是球，我觉得不一定只有别人做了能成球，自己才能成。肿瘤高度异质性，没准你先做出来的这个系能成。

作者: hottodeath 时间: 2015-4-27 09:38

回复 daviddow 的帖子
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我MCF-7和231同时养的，mcf-7没出来，这个是231的，也觉得奇怪，球拿去测流式，CD44+CD24-只有2.8%，也更奇怪了。之后决定再拿MCF-7试试，按坛里前辈给的指点。这位前辈养出了MCF-7的球，能否也给在下一些指点呢

作者: hottodeath 时间: 2015-4-27 09:40

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我再用MCF-7试试，谢谢！

作者: hottodeath 时间: 2015-4-27 09:45

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流式分析CD44+CD24-亚群的结果不好，应该哪出了问题，我之后再重复下，也再试试养下MCf-7，谢谢。如果我的这株231高度异质，那拿这个做出来的数据是不是就不能继续作为代表了？

作者: daviddow 时间: 2015-4-27 15:59

回复 hottodeath 的帖子! J" @* A- \5 C9 x# {: P0 G

CD44+CD24-只有2.8%感觉怪怪的。就是不富集spere，估计也都是80-90%啊。现在nature系列的刊物需要验证细胞系，你可以试试啊

作者: embryonic12 时间: 2015-4-27 16:45

你觉得CD44+CD24-亚群的比例低，有问题。但是这主要看你的实验目的了，如果仅仅是为了得到这群细胞，那就可以了。

作者: hottodeath 时间: 2015-4-28 09:10

回复 daviddow 的帖子3 x+ k+ b1 O* Z N0 m
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细胞系怎样验证呢？

作者: hottodeath 时间: 2015-4-28 09:15

回复 embryonic12 的帖子
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前辈还真点醒了一下我，确实我的目的是要获得干细胞样细胞的亚群，如果重复做了比例还是差不多，我试着多分一些看看能不能做后续的实验。

作者: daviddow 时间: 2015-5-8 14:05

回复 hottodeath 的帖子* j) `0 h4 O$ M* {. i7 Q
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好像最近nature有篇文章讲如何验证的。估计很多公司也开始做了

作者: hottodeath 时间: 2015-5-8 14:19

本帖最后由 hottodeath 于 2015-5-8 14:23 编辑 3 Z9 \4 v; Z) z w5 c1 ^5 i

作者: hottodeath 时间: 2015-5-8 14:32

上面是我换了一株MCF-7重新养的，培养基配方还是一样。先用的细菌培养皿（有少部分是悬浮的，摇不动的也是圆的），1天，请前辈们看看这个像你们养出来的sphere吗

作者: 木三阿凉 时间: 2015-6-20 20:41

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你好，我也在养球，球也形成了，但是有很多细胞碎片，请问怎么把球分离出来？

作者: 细胞海洋 时间: 2015-6-23 13:53

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作者: hottodeath 时间: 2015-6-23 14:38

回复木三阿凉的帖子# @: \ s( E, U7 ]8 G

球和细胞碎片好区分的话，用细胞筛就行。我养的MCF-7，死细胞及碎片相对球要少得多就没去管它，只传代离心弃上清这一步主要去除。只是流式做了几次，都没出CD44+CD24-的，不知道是养细胞出了问题还是流式前的操作不行。另我用的invitrogen的accutase,感觉好难消化啊

作者: haha224 时间: 2016-2-24 10:42

请问一下你的肿瘤球培养条件和接种密度是多少啊？我养的肿瘤球不成球。不过我测过231，CD44+CD24-有70-80%。

作者: 细胞海洋 时间: 2016-2-24 11:03

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