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标题: 胰酶消化 [打印本页]

作者: 莫邪小仙 时间: 2015-4-23 15:22 标题: 胰酶消化

间充质干细胞传代时基本都用胰酶消化，最近被迫纠结一个问题，消化时控制消化时间在3min以内，但是有很多细胞仍然不会消化下来。个人认为，不下来的细胞大部分不是我们要的MSC，当然肯定会有个别顽固的贴的比较紧。但是有人说我消化后残留的细胞太多了，需要进行二次消化，二次消化后仍然有很多细胞紧贴，如图所示。个人认为那些细胞形态拉长，轮廓不清根本不是MSC。具有筛选作用的应该是胰酶，培养液的筛选功能是第一次听说。请教大家，发表意见。[attach]69046[/attach][attach]69045[/attach][attach]69044[/attach][attach]69043[/attach]图1.2是100倍拍照，图3是400倍拍照，图5是40倍拍照

作者: wuxiao101325 时间: 2015-4-23 16:12

也可以说培养液初次筛选让想要的细胞增殖更多，胰酶二次筛选淘汰掉不需要的细胞，我们一般控制胰酶消化时间为1min左右

作者: 莫邪小仙 时间: 2015-4-23 16:35

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图中的细胞你认为是不是MSC？

作者: fengtingyong 时间: 2015-4-23 17:21

有种可能是胰酶出现问题了。如果不是胰酶问题，还和几个条件有关吧，比如消化温度，胰酶用量。消化过程中可以用手轻拍培养皿能使细胞容易脱落。我所做的是加酶后37度1mine左右轻拍皿边缘显微镜观察状态然后几乎脱落掉，少量没有脱掉的中和时枪的吹洗也可以使其脱掉。这是个人做的可以参考下

作者: deshenglll 时间: 2015-4-23 18:43

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消化不下来就不要了

作者: yahooyeah 时间: 2015-4-23 22:19

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3min消化不下来，肯定不是MSC，毋庸置疑。而你图片中的个人认为不是MSC。

作者: sdudai 时间: 2015-4-24 09:24

两点，第一，你消化的时间太长了，有损细胞；第二，消化不下来的细胞其实是老化的一些细胞，活性，状态已经很差了。

作者: woshibotao_01 时间: 2015-4-24 10:14

3MIN后贴壁细胞还不变形，估计是老化或者就不是MSC，可以不要了。
形态好的MSC加入胰酶放37度很快就会变圆脱落
楼主的照片感觉有的细胞可能是MSC，但是老化严重，消化不下来了。

作者: zhrt 时间: 2015-4-25 08:34

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首先在消化前先确定是不是MSC，如果是且没消化下来，可以试试先将胰酶放室温，回温，在消化，如果还不行的话，可以放37度，但是时间要把握好，不要酶消过度

作者: 孤野知—少帅 时间: 2015-4-27 17:10

请问你这是什么来源的间充质干细胞？有比较清晰的图片吗（上面的图片有些模糊）？你既然怀疑这不是间充质干细胞了，请你附上你认为确是间充质干细胞的图片好吗（做个对比）？我养的脂肪间充质干细胞遇到类似情况。

作者: chenlin080102 时间: 2015-4-29 21:31

按理说两分钟左右就够了，等大部分细胞变圆，少数飘起来了就可以了，再轻轻催一下就可以起来了

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