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标题:
原代的脂肪间充质干细胞变成了脂肪细胞？？？
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作者:
Cyclone2009
时间:
2015-6-7 16:31
标题:
原代的脂肪间充质干细胞变成了脂肪细胞？？？
取得SD大鼠做了脂肪间充质干细胞的原代培养，现在是第7天。
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今天用高倍镜看发现聚集在一起的细胞，尤其是中间部分，胞浆里面出现又圆又亮的小泡，像脂肪滴一样。。。
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我都没有动它，难道自己分化为脂肪细胞了？还是脂肪间充质没提出来，提出来的根本都是脂肪细胞呢？
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请有经验的战友指点呀
培养液是DMEM+10%FBS
f0 P3 ^! h: K
上图：：
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# [! L2 o( c9 z* K3 D( W
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作者:
Cyclone2009
时间:
2015-6-7 16:32
还有，我怎么感觉细胞这么脏呢？中间黑色的颗粒是什么呀？？
作者:
lgs1
时间:
2015-6-7 22:44
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Cyclone2009
的帖子
" V9 I7 Q9 @3 x; A; {$ ~
; f# @& z/ e) y/ a# b1 [. z
你可以用油红O染一下看是不是脂滴
作者:
s02260441
时间:
2015-6-8 10:26
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Cyclone2009
的帖子
1 `6 j( D- e+ p7 R
: b* S9 ]; C7 C i
建议可用oil red染色看看。
! D9 R* v* e1 {9 Z, O& m! Z
3 k" v, W1 D8 {# g0 y, @
不过正常的SVF分离步骤应该不会有太多的脂肪或油滴进入培养盘中才对，可以请您概述一下操作方式吗？
作者:
Cyclone2009
时间:
2015-6-8 10:39
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s02260441
的帖子
: l; _5 W/ k6 p+ J1 ?
/ i4 r+ G3 ]9 G: \8 F) T
是呀，根据文献和论坛里的经验贴提取的SVF.
2 I$ U& g1 `, Q& z% c1 d |5 A
大致的步骤是：
6 h( m* i! ]& b! l3 T3 F
SD大鼠200g左右，断颈处死后酒精浸泡5分钟，取腹股沟脂肪组织，剔除血管和筋膜，剪刀剪碎，加0.1%胶原酶，37摄氏度摇床60min消化。之后加入培养液中和，反复吹打，300g离心5分钟，去除上层漂浮的脂肪组织和上清液。沉淀再次用培养液悬浮，离心300g 5min，小心吸出上层的油脂。最后取沉淀悬浮接种。。
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我没有用到滤网和红细胞裂解液。。
作者:
wf78365421
时间:
2015-6-8 11:07
不是脂滴，应该是细胞老化的空泡。你可以用油红O染色鉴定下。
1 N0 l8 G1 I, ~/ C& f6 h
作者:
chenlin080102
时间:
2015-6-8 11:57
用染色方法先确定一下是否是脂肪细胞
作者:
s02260441
时间:
2015-6-8 13:20
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Cyclone2009
的帖子
# z5 }( i- u7 Z3 z- I
% P9 P0 m% C) I0 U/ S/ k
操作步骤应该没有什麽问题。
+ Y# P# Z3 A' D
+ j, v2 b9 g4 r+ {7 }
那就试着用Oil red染色吧！
" K; |( k5 p+ H0 v
% ]/ p6 N/ q/ G( V8 c; d* t& J
另，也可以试着传代再继续培养看看。
作者:
baicaikua
时间:
2015-6-8 16:21
我觉得是间充质老化，消化过度了吧
作者:
baicaikua
时间:
2015-6-8 16:21
我觉得是间充质老化，消化过度了吧
作者:
Cyclone2009
时间:
2015-6-8 19:12
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baicaikua
的帖子
% o$ V& H: T) t
N4 x" a/ N( d/ H8 J N
还没有消化，这是P0
作者:
baicaikua
时间:
2015-6-9 09:02
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Cyclone2009
的帖子
& B+ i9 h7 Y+ s: @
& k9 g% k# Y. S( F t8 O
组织消化过了？会不会。感觉真的好像细胞损伤老化的感觉。
作者:
Cyclone2009
时间:
2015-6-9 12:56
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baicaikua
的帖子
, S( s( U& S* E+ [
. P% \4 j8 p8 A( p) Y) l: i7 ]4 H
想问问你是怎么看出来细胞老化的呀？老化的细胞都有什么特征呢？我感觉我的细胞增殖还蛮快的，double time基本就24-30h。。
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养细胞新手，求多指教呀
作者:
Cyclone2009
时间:
2015-6-9 12:56
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baicaikua
的帖子
4 ^" i& ~6 z0 k! u* g5 p. P
3 i6 W- L5 r2 M+ u% Q. O
这是当时消化了60min，不过条件我一直在优化，又做了一批是消化30min的，等看看细胞会不会好点。。。
) M7 @7 D4 a6 |: Q
anyway, 谢谢你呀
作者:
baicaikua
时间:
2015-6-9 16:18
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Cyclone2009
的帖子
2 g1 }1 A/ S, s" R0 i& a; ?( _
0 f Z( e! M, [5 c# n4 n9 V. o/ N
我们一般半个小时之内。。
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