小鼠胚胎成纤维细胞冻存

zhbshi998

小鼠胚胎成纤维细胞冻存的程序：我们做的是4摄氏度30min，-20摄氏度3h，-80过夜，然后放入液氮中长存，短期使用时就放在-80中。复苏的时候短期内感觉还是有细胞存活（帖壁生长），但是感觉有些冻存管中的细胞有很多不能贴，也不知道冻存时间久了后会不会存活更少，最近我有听说冻存时一般-20摄氏度中最好放30-60min，有点担心我们的操作会不会出了问题。我很想问一下这种细胞冻存时有这样做的没，还是有其他更好的冻存方法，希望愿意分享同仁分享一下，谢谢！

jinyiran

我们一般是4度30min,负20度，1～2小时，然后转入负80度过夜，第二天转入液氮中。不过现在一般都直接用冻存盒了，那个比较方便，不过一般用几次后要记得更换异丙醇，不然会影响细胞冻存质量。

jinyiran

回复 loveL85 的帖子- d. i: F$ m) Q# m% ?" E  x4 S+ e
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你冻存前的细胞有部分培养过吗？确定细胞状态本身是没有问题的吗？你试着提高血清的浓度，看看会不会好一些。降温的过程和我们以前的一样，不过推荐你可以使用冻存盒，那个很方便。

loveL85

呜呜 我自己提的原代MEF冻存仅一个月，在复苏的效果超差的 存活率几乎为0  我的冻存液是70%DMEM+20%FBS+10%DMSO  b" t6 _) S( T+ a  B
4℃1h -——负20℃2h——负80℃过夜——液氮' |9 ]2 b/ F2 J6 N0 K$ ?) |+ x
是我冻存液的原因呢 还是降温过程的原因啊？" i5 X# h& R8 q. g
就因为这样 导致每次都要重新交配老鼠进行提原代细胞

deron

美女研究员的待遇真好~

zhbshi998

恩，不错

wangming

冻存液与冻存操作程序相互配合，冻存细胞复苏时状态都很好。冻存液：90%血清+10%DMSO（不宜过多），冻存操作程序：放入异丙醇冻存盒，直接进-80度过夜，然后进液氮长期保存。

xiaodiao123

我们是4度1个小时，然后直接转到-80度过夜，最后转入液氮中。细胞效果还可以。

hjhzhhy

不错啊

懵懂干细胞

流程跟你做的差不多。或许你可以检查一下你们冻存盒里面的异丙醇（梯度降温作用）够不够。* S& q0 l0 \* i7 I
另外我给你附上一个改进的细胞冻存方法吧！; t/ Y4 \8 R& e1 f0 f9 @
http://www.stemcell8.cn/thread-25325-1-1.html