旧菜翻炒——关于细胞冻存

deron

今天冻存细胞的时候忽然想到，以往不管是程序冷冻还是梯度冷冻，细胞放入-80后，都是等待过夜再转入液氮，那么如果-80放置一两个小时，等冷冻管内液体基本达到-80之后，直接投入液氮中，与过夜相比有没有差别？6 `! W/ D8 B; z
是否过夜只是一个保险措施，防止冻存管内液体未到-80？有没有大侠关注或者做过类似的实验？

houbara

1. the time in -80c, depends on the cryo-vial and temperature decreasing rate. if the temperature decreasing at -1C per minute, eg, Bicell. it would be more than enough to keep cells in -80 for 4hours. To cryopreserve cells for a short time,1-3 mon, you can just leave it in -80c
7 m3 e2 R  f7 t2. For longterm preservation, it is better to transfer your cells into LN2! c7 k! F! s$ q
3. Overnight in -80, it is just for the work convinience.
1 ^" ^6 K- H' m% N1 g
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5 ~  ~4 k9 p8 O. E1 I过夜是为了好安排工作，-80 放4小时就可以

shashou_com

这个没试过，下次你试的时候记得给大家说下结果。

hub12333

我冻的细胞一般都是4-5小时就从-80到液氮，复苏后细胞也可以，没得太大问题

houbara

过夜是为了好安排工作，-80 放4小时就可以。

wdx0502

同意huangcong1988 的观点：方法选择由细胞而异，其实我没拿到一种细胞（陌生的）会实施对比不同的方法：包括冻存，冻存后存活率等。
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yyshpy

对于大多数细胞应该是可以的

279042256

我们是上午-80，下午快下班液氮，下午-80，晚上液氮保存，也就4-5个小时

山羊

梯度冻存放-80°4个小时就可以了，实验室有师兄就这么做的，也没啥问题

huangcong1988

其实要看你冻存细胞的种类，而且需要冻存的时间也要考虑的，比如说，细胞只需要短时间冻存，那么你直接梯度降温后放负80就可以不管了，到时候要用直接取出来复苏就行
/ L# m  y/ T: _* ~9 Y( Y, n) @9 g但是如果你要长时间冻存的话，建议梯度降温后还是再负80过夜后再放入液氮罐中，因为细胞适应低温需要一段时间
+ s( Y3 p1 E% k3 x9 A0 a有冻存盒话话可以大大节省时间，冻存盒应该也不贵，几百块钱5 X, x. z# ~3 @# w4 J1 Q; {  x: ~
至于说冻存管温度达到负80就直接放液氮罐，还没试过