关于细胞培养厌氧菌污染问题

hawkyiger

我们实验室培养脐带间充质干细胞，已实现小规模生产两年有余，但最近在取细胞冻存前培养液检菌时连续出现厌氧菌阳性，用的是梅里埃的全自动血培仪，不知道各位有没有类似情况出现，实验室卫生清洁都是常规的，还没有分析出原因

大少爷

冻存前培养液检菌时连续出现厌氧菌阳性，这种情况只能是细胞废弃了，这几次细胞是否来源于同一条脐带或者同一批种子细胞，如果是那就是这上面的问题。如果是不同来源不同批次细胞都出现这种问题，可能是共用的哪个试剂有问题。这两个可能性最大。

hawkyiger

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8 G5 X  c9 G7 T$ f  ?( m属于不同来源不同批次的细胞，一开始也考虑是试剂或操作原因，但是在连续冻存的样本中，并不是所有的全部出现污染，另外厌氧菌的出现感觉很难理解，使用的是细胞培养瓶，细胞在经过1个月左右的培养后竟然出现厌氧菌污染很蹊跷。

swtarron

要从细胞来源、所用物料和培养基批次、培养箱、生物安全柜等几个方面综合分析，还有看是不是梅里埃的问题，我们以前出过梅里埃同一个孔连续需氧菌报阳的问题，最后发现是梅里埃的问题。

大少爷

实在找不到原因，配培养基时在1L培养基加两支 80 万 IU 硫酸庆大霉素注射液。

fuyinsheng

首先确认污染的是不是一个脐带上的细胞，是不是主细胞库该批次细胞污染。然后检测下确定目前实验室用的这批试剂和耗材没有问题。梅里埃培养的厌氧瓶最好送到微生物鉴定机构去查一下微生物种类（可以推测菌属和菌种来源，方便调查污染原因）顺便确定是否存在血培养仪假阳性。厌氧菌增殖不像需氧菌那么快，染菌量的数量少时培养后期才发现也正常。7 J& c" g5 L7 ^& U8 C/ ^0 t) _1 P
如果这些细胞是前期检过菌，合格后冻存的细胞也属正常，因为厌氧菌污染梅里埃血培养仪检出率并不是百分之百（增加取样量能提高菌的检出），前期制备培养主细胞库时有可能没有检出，后期细胞培养中菌多了才检测出来。

a276038921

还是从设备上检查检查吧，

毛球

检查细胞培养箱，彻底消毒

pauldong

将阳性的检测瓶取出，然后取样、接种培养、染色，鉴定是哪一种类型菌种，分析可能原因是由哪个环节引入的，然后各个环节全面排查，重点排查可疑环节

Demon_CN

你这边的话得排除下大面积污染的原因。; ?( S8 T6 y0 g$ G2 N
1、试剂：换一批培养基，或者培养前检测下，没有问题再排除其他的
9 B8 ^4 b, m! t4 @5 N, I. G2、种子细胞：复苏不同液氮罐里、不同批次的细胞，或者复苏洗涤的时候可以留样检测
0 `1 u2 i0 f) r- Z3、培养箱：这个同种菌种污染几率也比较大。这个想检测的话就用培养板放一个小时然后检测下是否有菌
. n( i' n8 }% Y) @" y0 `5 N, [. Q4、耗材：这个方便比较难查，问问供应商三证和进货渠道。不行换批耗材" m! y; b1 Y! j, r. u( W
人员空间环境这个就看管理了。