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外周血细胞分离效果不好   [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2016-3-17 21:39 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
外周血放置在四度冰箱4小时左右采取分离细胞,步骤都按正常的走,可是分离的白膜层和上清液分解线不清晰,没有之前的立即做的效果好,碰到这种情况怎么处理????谢谢
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沙发
发表于 2016-3-17 22:28 |只看该作者
在加ficoll前混匀一下,试试
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藤椅
发表于 2016-3-17 23:47 |只看该作者
1.把血液样本和Ficoll都静置到常温再用
% W6 ~4 Q7 V3 i  l/ l$ D1 Y2.用新的Ficoll/ F  `3 M. Y2 L
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金话筒 优秀会员 帅哥研究员 小小研究员

板凳
发表于 2016-3-18 07:46 |只看该作者
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把buffy coat和上层清液都抽出来,混PBS,混匀了离心
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报纸
发表于 2016-3-18 07:51 |只看该作者
如果采血后到实验室可以分离这一个时间段不是很长,建议不要存放在4°,直接放于室温,这种情况下分离效果会好一些。另外就像楼上说的那样,确保血液和ficoll复温后在使用,或者ficoll直接37预热
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地板
发表于 2016-3-18 08:46 |只看该作者
放在4度的时间有点久了,最好立即处理,三四个小时不用放冰箱,拿出来最好到常温在做!
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金话筒 优秀会员

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发表于 2016-3-18 08:46 |只看该作者
1.血液保存的时候最好有摇床。$ A' D/ z3 t; i9 N' g4 f) y, }
2.将血液放置常温在操作,不要加热哦。
) b6 ~% ?8 G1 L1 f3 Q- t3.加大生理盐水的稀释倍数。* O3 X( \2 ^- U8 m* m; v
4.挽救措施,将红细胞上面的细胞都收集起来,加生理盐水或PBS混匀,然后加ficoll重新分离。6 `" I4 w' Q) ]2 F" H0 Y9 i/ N
希望能帮到你
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发表于 2016-3-18 09:01 |只看该作者
1、血液样本和Ficoll都恢复到常温;
; V! D' C) s" j/ _  @2、Ficoll缓慢加,尤其是刚开始是一定要慢;
, d7 z* ^' Y" @# {6 b" J3 C3 j3、离心机的离心力要合适。
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发表于 2016-3-18 09:19 |只看该作者
不要放在4度保藏,ficoll要平衡到室温,离心机参数要适合,我觉得主要问题还是血放在了冰箱了
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发表于 2016-3-18 13:05 |只看该作者
回复 拉二胡的拉尔夫 的帖子- Y4 i# K4 e  }% r

3 S2 d. @0 \7 {' e% k如您第4条所说,这种情况您实际操作过吗?效果好吗?是否需要再吸点红细胞层靠上层的一点点细胞,考虑到可能会有部分白膜未分离出来,求指点~谢谢
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