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免疫磁珠是怎样做的 [复制链接]

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楼主
发表于 2016-6-13 15:37 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
怎么 做免疫磁珠
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沙发
发表于 2016-6-13 16:02 |只看该作者
磁珠抗体分选获得CD4+CD25+T细胞方法:
* _, s) D$ i; k9 z+ h: l取1×107个细胞量,用含0.5% BSA,2mM EDTA的PBS(buffer液)重悬,加入适量的生物素标记的鸡尾酒抗体(Biotin-Antibody Cocktail),混匀,4℃避光孵育10min,再加入适量抗生物标记的磁珠(Anti-Biotin MicroBeads)和CD25-PE抗体,混匀,4℃避光孵育15 min,用buffer洗涤后1000 rpm离心10 min,弃上清液,沉淀用500 μl buffer重悬,置LD分离柱于MidiMACS分选器中,l ml缓冲液冲洗LD分离柱2次后,将细胞悬液加入分离柱中,收获从分选柱中流出的细胞即为CD4+T细胞。将收集到的CD4+ T细胞混悬液1000 rpm离心10 min,弃上清液,沉淀用buffer重悬后加入适量的抗CD25-PE磁珠,混匀,4℃避光孵育15 min,用buffer洗涤后1000 rpm离心10 min,弃上清液,沉淀用500 μl buffer重悬,置MS分离柱于MidiMACS分选器中,l ml缓冲液冲洗MS分离柱2次后,将细胞悬液加入分离柱中过柱,再用buffer过柱直至流出液清亮不含细胞,将柱子移离分选器后,收集柱中细胞即为CD4+CD25+ T细胞
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