- 积分
- 43
- 威望
- 43
- 包包
- 356
|
磁珠抗体分选获得CD4+CD25+T细胞方法:
* _, s) D$ i; k9 z+ h: l取1×107个细胞量,用含0.5% BSA,2mM EDTA的PBS(buffer液)重悬,加入适量的生物素标记的鸡尾酒抗体(Biotin-Antibody Cocktail),混匀,4℃避光孵育10min,再加入适量抗生物标记的磁珠(Anti-Biotin MicroBeads)和CD25-PE抗体,混匀,4℃避光孵育15 min,用buffer洗涤后1000 rpm离心10 min,弃上清液,沉淀用500 μl buffer重悬,置LD分离柱于MidiMACS分选器中,l ml缓冲液冲洗LD分离柱2次后,将细胞悬液加入分离柱中,收获从分选柱中流出的细胞即为CD4+T细胞。将收集到的CD4+ T细胞混悬液1000 rpm离心10 min,弃上清液,沉淀用buffer重悬后加入适量的抗CD25-PE磁珠,混匀,4℃避光孵育15 min,用buffer洗涤后1000 rpm离心10 min,弃上清液,沉淀用500 μl buffer重悬,置MS分离柱于MidiMACS分选器中,l ml缓冲液冲洗MS分离柱2次后,将细胞悬液加入分离柱中过柱,再用buffer过柱直至流出液清亮不含细胞,将柱子移离分选器后,收集柱中细胞即为CD4+CD25+ T细胞 |
-
总评分: 威望 + 5
包包 + 20
查看全部评分
|