Cellectis宣布在美建厂，准备用于大规模生产通用CAR-T

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Cellectis宣布在美建厂，准备用于大规模生产通用CAR-T
- A1 q$ ]8 u9 b6 f  @! A. s2019-03-14 18:02:21 + L7 U% e& }2 G: D) r0 c
几周前，Allogene宣布将在加利福尼亚州纽瓦克建造一个118000平方英尺的细胞治疗制造工厂，以支持其Allo CAR-T候选疗法产品供应。  ]+ a* K9 L. `# C
同时，Allogene的首席技术官Alison Moore在一份声明中说道，“建立最先进的制造工厂是我们更快、更可靠、更大规模地提供现成细胞疗法的战略的核心。”
+ G; h8 U  T8 z1 e+ V" H2 K这一消息一经发布，业内关于同种异体CAR-T更是议论纷纷。这讨论的热情稍稍褪去，近日，法国细胞疗法公司Cellectis又宣布，将在北卡罗来纳州建造一个82,000平方英尺的商业制造工厂，以生产其同种异体CAR-T产品，并已签署了租赁协议。7 N8 Y! `; ~- i
据Cellectis称，计划建于北卡罗来纳州罗利的工厂名为IMPACT，将负责临床和商业生产。该公司还开始在法国巴黎建造一个14,000平方英尺的工厂，为其UCART产品提供原料供应。/ t! D7 h$ n2 K- a& R$ h
根据美国食品药品管理局（FDA）和欧洲药品管理局（EMA）的指导原则，这些新的制造工厂将允许GMP制造临床和商业产品，并将完全配备以支持监管批准。# q% o6 `6 l+ n( Z% H# B2 ?$ y  x
之前与许多生物技术公司一样，Cellectis依靠合同制造商为其UCART产品提供临床试验产品和原材料供应。然而，去年该公司决定将制造，这也是细胞疗法的关键一步，在内部进行。" d" W6 n, N" k0 D: g
Cellectis首席执行官André Choulika在3月7日的一份声明中说到：“现在正是创建自己的供应能力的最佳时机。Cellectis将获得制造业务的自主权、控制权以及专门知识，使我们能够继续建立竞争优势，并继续保持在领域中的领先地位。”
% F- I0 @- T3 ], z6 F, X" @5 B' I# oCellectis作为一家走在通用CAR-T研发前沿的公司，已经被业界广泛熟知和关注。Cellectis的TALEN基因编辑技术和开创性的电转系统PulseAgile为开发安全有效的下一代免疫疗法奠定了基础。UCART通过TALEN基因编辑技术，敲除TCR等相关基因，避免移植物抗宿主病。8 z- \8 M+ F1 [3 Q

' z. d3 k& j; I4 I, TCellectis公司UCART简介
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* O7 |- J" y9 |UCART制造流程（图片来源：cellectis.com）
: q2 g$ S9 K1 p9 E( qUCART的生产制造
( A9 C& H9 T3 r' C8 \之前对Cellectis的关注点一直放在新疗法和临床试验进展上，今天我们将看看通用CAR-T生产制造相关的内容。1 r% E- i, I9 E, q& i4 T1 v7 s
UCART的生产过程与自体CART大体上类似，不同点在于UCART的原材料是健康捐献者的血液而非病人自身的血液，其次UCART生产过程中多了一步，引入基因编辑工具敲除某些特定基因。
4 N' j4 W0 m6 t9 U6 \, h4 w5 S; m* t在目前的自体型CART生产工艺中，Kite的工艺最为简便，周期也最短，为10天左右；Novartis的生产工艺最为标准，经过后期优化后周期仍有22天；Juno的生产周期在14-18天左右。目前UCART的GMP生产周期大约为19天，其具体过程如下。
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) u; I3 L% v! e% Y4 F4 m6 XUCART GMP生产过程
1 h5 A0 c) V' L$ @5 i6 }2 @2 ~UCART初始材料：健康捐赠者细胞
' I+ {7 R7 a4 g2 W$ Y* B8 G首先从健康的美国捐献者血液中分离单核细胞（MNCs），这些捐献者血液来自FDA批准的，加利福尼亚州批准的，美国血库协会（AABB）认可的，临床试验标准（CLIA）认证的血库。" x% C! I3 j# B) n% a* e: H3 s
所有的捐献者都需要经过挑选，筛选（采集前的14天内）和检测（采集的当天）。所有的人类细胞的捐献，获得，检测，加工和存储都遵循欧盟和美国的相关法规和指导意见。0 _* f! D5 `5 a
从MNCs中分离淋巴细胞（一般的产量大于4x10^9 cells），一次UCART生产的初始细胞数目通常为收集到细胞的1/5-1/3（10^9 cells左右）。
! B0 T6 S! H/ U6 N3 \Day1到Day4：第一次T细胞改造（慢病毒感染）2 t& u7 a2 {: Q/ F% y8 f
使用识别CD3/CD28的抗体偶联beads激活T细胞。使用GMP级别的，由第三代慢病毒载体包装的慢病毒感染激活的T细胞，使得RQR8与相应的CAR在T细胞中表达。- l0 R0 ]$ f" T) ~
Day5:第二次细胞改造（TALEN介导的基因编辑）
6 M: v1 L8 T0 n. k1 h5 j4 n! x7 P8 m将GMP级别的TALEN编码的mRNA通过电转转入到经过第一次改造的T细胞中，使TALEN瞬时表达。! u7 P& g7 I: i6 Y7 h
TALEN能够识别和切割TRAC与CD52基因组DNA，形成的DNA双键裂断由非精准的NHEJ修复方式修复从而导致TRAC与CD52基因的敲除。
) N( h7 I# S3 H3 UDay6到Day17：细胞扩增
+ j4 a9 i( w6 Q. V2 C3 y" o在可控的培养系统中将细胞扩增到10^11 cells左右。
; Z6 `. z8 m8 e! _2 SDay18-19：细胞纯化与分装4 e# q& {! ~4 \8 l: O1 t
使用抗体-磁珠偶联的beads，分选纯化出TCRαβ阴性的T细胞。（此为一个重要的放行标准）
( Z* ?3 |/ J1 y7 _$ J$ y细胞的分装与冻存。每个产品一般都会有2-3种剂量形式，用以满足可能的剂量递增需求。
' Z0 K# i3 \  n; z. CUCART的QC标准
1 Z. ?) S- d+ ~0 d. a# x: w虽然现在还没有详尽的法规来规定CART产品的QC标准，但是CART产品还是需要一系列的质量检测。其中产品的纯度，即≥97%的TCRαβ阴性细胞是一个重要的放行标准。此外产品的无菌性，内毒素，支原体，以及是否含有可复制的慢病毒都需要进行一系列检测。产品对于目标细胞的响应（包括相关细胞因子的释放与细胞杀伤活性）也应该被检测。 % W6 c- l4 k4 V! H# M. [( \- M, m

" F- B3 m" ?- h& ]1 VUCART的QC标准
, a. l' I8 T8 r* h同种异体CAR-T相对于自体CAR-T的优势不必赘述，当然也必然是在有效克服同种异体CAR-T更高挑战的前提下，如更大的免疫原性风险和排斥反应，编辑效率与细胞毒性的问题等。（生物谷Bioon.com）5 G7 p* E& e4 f* i& [
参考出处：* f4 I5 L% T5 \8 V2 d! G
https://www.biopharmadive.com/news/cellectis-to-bring-car-t-manufacturing-in-house-with-new-plants/550104/3 |& O1 O$ G/ K! T- [
https://www.cellectis.com1 I3 K1 r0 U& o. M2 Y6 ~" b
生产制造部分内容参考生物制药小编
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