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unizol对细胞的毒害作用 [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2010-5-7 17:20 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本人在培养细胞的时候,用六孔板中的一孔做PCR,提取RNA时使用了unizol。想问下各位,残存的unizol会不会对其余各孔细胞产生毒害作用呢?
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沙发
发表于 2010-5-7 18:58 |只看该作者
最好是不要这样,裂解液的味道很大,很强,会影响板上其余的细胞,但这个具体影响的程度没有实验数据来证明。你可以把细胞消化下来离心,吸掉上清,剩余50ul左右的时候重悬为单细胞,然后加裂解液,记得一定要重悬为单细胞再加,否则裂解不完全RNA会降解!(我中过招了
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藤椅
发表于 2010-5-7 18:58 |只看该作者
最好是不要这样,裂解液的味道很大,很强,会影响板上其余的细胞,但这个具体影响的程度没有实验数据来证明。你可以把细胞消化下来离心,吸掉上清,剩余50ul左右的时候重悬为单细胞,然后加裂解液,记得一定要重悬为单细胞再加,否则裂解不完全RNA会降解!(我中过招了

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板凳
发表于 2010-5-7 21:16 |只看该作者
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谢谢,下次做的时候一定注意。希望我的细胞坚强啊。

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报纸
发表于 2010-5-8 21:15 |只看该作者
回复 3# 不倒翁 . p- g% H+ x  l5 ?) y
当时你是没扩增出基因吗?

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地板
发表于 2010-5-8 21:17 |只看该作者
trizol对细胞有毒,如果实在只取一孔的话,建议你洗去trizol后用PBS洗2次,然后PBS液封,不然细胞基本活不了。。。。
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发表于 2010-5-11 23:07 |只看该作者
回复 5# angel-sakura . m, T' g* h  `9 B2 }9 F

$ q/ J! w4 \8 `# `7 ^
9 u  i& L* H1 V3 K2 t9 N6 [    你是指哪种情况?

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发表于 2010-5-12 00:11 |只看该作者
回复 7# 不倒翁
; }4 h6 `! U$ `9 N
2 S& `  o+ D# L3 b  N你说你中过招了,是不是因为你没先消化下来在加trizol混匀基因就P不出来?
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发表于 2010-5-13 11:33 |只看该作者
回复 8# angel-sakura 7 v- k' Z& |. {  L

; p7 k5 e4 H& w. A6 y5 f# O! G, A% R% A  E
    哦,不是p不出来,是降解很严重,real time的时候actin差到十几倍,当时同一批的还有几个样品是在孔里裂的就没有问题,所以肯定是没重悬好的原因了,师兄也这样解释的。
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发表于 2010-5-13 23:37 |只看该作者
应该是有毒,我遇到过类似情况,用的trizol提取一孔细胞,没有用PBS漂洗,过了两天周围细胞都死了。
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