小鼠胚胎成纤维细胞冻存

zhbshi998

小鼠胚胎成纤维细胞冻存的程序：我们做的是4摄氏度30min，-20摄氏度3h，-80过夜，然后放入液氮中长存，短期使用时就放在-80中。复苏的时候短期内感觉还是有细胞存活（帖壁生长），但是感觉有些冻存管中的细胞有很多不能贴，也不知道冻存时间久了后会不会存活更少，最近我有听说冻存时一般-20摄氏度中最好放30-60min，有点担心我们的操作会不会出了问题。我很想问一下这种细胞冻存时有这样做的没，还是有其他更好的冻存方法，希望愿意分享同仁分享一下，谢谢！

juan880929

-20度2个小时就行。冻存液最好用90%的血清加10%的DMSO。我们这样冻存效果很好，也可以试一下程序降温盒

军医

我们这4度20分钟，直接-80过夜，第二天放液氮。效果也可以。

wky98

回复 1# zhbshi998
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    冻存流程和你差不多。我-80度冻了20天左右，复苏还好，死的不多。

daviddow

4度1个小时就行,然后直接冻存在液氮罐中。冻存液是90%的血清加10%的DMSO。我们一直用这种冻存方法。

上海过客

直接用冻存盒 ， -80  冻 24小时 ，转入 液氮 或-80  。 自试  ，半年 细胞活力不减 。

zsc78

直接用泡沫盒封装，置 -80  冻 24小时 ，转入 液氮。一直这样冻细胞，好像没有什么问题。

zhbshi998

谢谢各位啦

youyou0795

我们一般都是4度，-20各30min，然后-80度过夜，用20%FBS+10%DMSO作为冻存液，效果很好， 有一次忘记了，在-20度冰箱放了4个小时，复苏的时候确实形态不好，长着长着就越来越少了

maozhuxiwo1

直接用泡沫盒封装，置 -80  冻 24小时 ，转入 液氮。一直这样冻细胞，好像没有什么问题。- o& `: o0 ?4 a& Z+ ?" B. A
zsc78 发表于 2010-7-11 18:39

3 q& J  l/ v3 {
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; A* F  [. M# u" p4 _2 t    今天我第一次看到老师用这种方法冻ES，泡沫里面直接-70。
! J: l9 ?7 }  F8 `) W   恩恩···原来技术娴熟的研究员 都有自己的方法啊！  多学习···恩恩恩