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很有意思的问题!# h; w i7 {4 d9 A4 J
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这是一个设计到干细胞球换液和传代的问题。/ B: t0 u0 H2 n3 z) U5 R
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先说干细胞球:不同细胞来源的干细胞球其形成球的速度、大小和致密程度是不一样的。即可分为紧密球和疏松球。疏松球球内细胞结合松散,吹打即可使之分散。所以单纯换液,建议根据生长速度,3-4天添加新鲜培养基即可,根据球大小传代,一般球直径不宜超过200um。对于紧密球,吹打往往是无效的。换液方法可以直接加液 也可以离心换液。 同样紧密球直径也不宜太大,建议150um时传代。方法1:离心后胰酶消化+吹打。火兄分析的对,胰酶消化细胞膜表面的蛋白是有影响的,所以分析前尽量勿用。另外提到的另一个酶是Accutase,挺好的。
! K9 b6 ~& K5 x. y# A+ t方法2:机械分割。将细胞悬液经细胞滤器滤过同时分割球。我们基本采用这种办法。
5 l: q8 N* H) r, E3 W: h2 @相信以上方法对各位可行有益。 |
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