请教iPS诱导过程中的问题（有图）

上官鑫

请教各位高手如下问题：（1）mouse fibroblast 诱导过程中，细胞形态会发生变化，慢慢变圆，如图，但是最终不能产生iPS，几次都是这样，而且feeder变的很差。
- x9 u& t3 x; R+ |( ?（2）Feeder和media养ES没有问题，如图，但是把诱导后的Mouse fibroblast铺到feeder上，换成养ES的培养基，Feeder不到2天就变的很差很差，不知为何？还望各位高人指点。

上官鑫

用的自己取的原代MEF，然后传代到第4代左右用于诱导。包装病毒用的293T，我也想用高级点的包装细胞，但是这个实验室没有，而且用的钙磷瞬时转染。pMXs经典的O，S，C，K诱导。那个ES只是随便养养，想检测一下我的media和feeder有没有问题，这里有趣的事情就发生了，media和feeder养ES没有问题，但是用来养induced MEF，不到2天feeder就变的极差，我也怀疑是不是引入的induced MEF被污染了，但是除了feeder基本上死光光了，induced MEF又能长起来。很奇怪。shewawa说的很对，这些变化的细胞挑克隆根本就expand不了。

上官鑫

但是如果有支原体污染，为什么induced－MEF又能长的很好呢？是因为它比feeder抵抗力强吗？其实用普通的media养没有问题，一换成ES media养，feeder就很快死翘翘了。我怀疑是media有问题，就用它养了一下ES，结果ES又能长好。其实我也觉得是支原体污染，因为ES media有20%的血清，正适合支原体生长，是不是降到15%会好些？其实我还怀疑pH的问题，那个ES media配出来就是接近黄色的。
. E2 ~: [! {+ a   关于代数问题，P4还好啊，以后还要诱导人的，那个都是10代左右了，前途渺茫啊。
* @) G- ]9 b; J1 ]5 C   pUMVC和pCMV－VSVG包装，加上目的质粒，3质粒共转，那个pUMVC是low copy，不好用。

上官鑫

有道理，但是我用ES media单独养feeder，也是过两天就死了，用ES media同时养ES和feeder就能长的很好，很神奇。

上官鑫

我KSR和FBS for ES的都试过

上官鑫

media test了放培养箱n天都没有变化，也过滤了试过。我就是不明白feeder用DMEM+10FBS养就挺好的，一换成ES media就变差。