关于血清灭活

zuming

总对血清灭活有疑问，灭活到底有多大用呢？高温对血清肯定是没好处的啊！请高手指教！

shiqingxi

灭火主要是灭火补体 蛋白类物质 避免在培养中出现问题 病毒也可以灭活下 。个人认为

lipd09@mails

我也存在这样的疑问，我试过用灭活和没灭活的血清养家兔的MSCs，从形态和增殖速度来看并没有区别，要不你也试试你的细胞，观察一下，期待你的结果。

zuming

回复 3# lipd09@mails
' s' G- \# }4 X  G1 r我试过ht1080和3T3，并没有发现明显的差别，当然我测试的代数不多，不知道长期会有什么影响。

w1986725

灭活的作用是杀死血清中对细胞培养的有害成分, 一般使用灭活的血清对细胞的有害影响最小, 购买成品灭活的血清较为安全,也可自己灭活

清影

关于血清的热灭活，是很多人感兴趣也存在一定争议的话题。大多数实验室将血清的热灭活还是作为常规来执行，因为有两个作用，第一是灭活补体，第二是灭活血清中可能存在的支原体。但是实验者并没有考虑热处理对血清中的生长因子、氨基酸等成分带来的负面影响。- [9 V7 D9 K0 T( Z5 J$ I4 t; O; K
我在实验室处理血清的时候，有一次水浴箱在灭活过程中出现故障，温度升高到80℃，血清变成了凝胶状，我重新处理了另外一份血清，将两份血清对比，发现高温直接影响到血清所含的抗体蛋白。在56℃下灭活半小时以上，肯定也会对里面的蛋白起到破坏作用。下次有机会我做个延长灭活时间的实验试试，看看到底有多大的影响。热灭活之后，血清放在四度冰箱久了，就会有沉淀产生，这常常会被认为是微生物污染或者是黑胶虫污染。为了验证到底有没有污染，常常又会把血清放置37℃温育，但是血清中的蛋白会进一步析出，最后还是要做镜检，无菌培养试验，和革兰氏染色试验，非常麻烦。4 y( y7 i4 {* c0 J7 r( q3 {
我看过一份资料，里面提到70%的实验者认为灭活是理所当然的。常规灭活建议的温度在45℃到62℃之间，而时间则从15分钟到60分钟不等。其中最常用的手法是56℃热处理30分钟。随着血清采集、处理、加工工艺的提高，许多早先认为是热灭活的原因已经不再成立，只有少数对血清进行热灭活的研究者在实验中证实了这一步骤的有效性和必要性。有人比较过11个不同细胞株，发现其中热灭活对6 个细胞株(HBAE，MDBK，Vero，成纤维细胞，MRC-5)的生长带来负面影响，三个细胞株(FOX-NY，MDCK和CHO-K1)不受热灭活的影响，而只有两个细胞株(Balb/3T3，Sp2/0Ag14 hybrid)，在热灭活之后，细胞生长有轻微的改善。所以，在正常的操作下，热灭活通常对细胞的生长没有明显的促进作用。6 i0 f! r3 z3 r; U1 f
你可以摸索一下，血清从-20℃冰箱拿出来之后在常温解冻，然后混匀分装成两份，一份灭活，一份不灭活，比较这两种血清对细胞是否有影响。然后再确定是灭活还是不灭活。这个过程最多也就一个星期。同时你还要考虑血清灭活与否对你后续的实验有没有影响。% K1 P# E+ G. x! T% a

zuming

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相当到位，谢谢了！

deron

如果只是补体灭活，个人感觉在细胞培养中是没有必要
3 {  ~0 e$ l( J( m) z4 w: _  c补体作用的三个途径——经典、旁路、MBL，其中没有抗原抗体反应，经典途径不会发生，另外甘露糖常见于细菌表面，我们养的细胞很少见，MBL途径也不会发生，剩下的旁路途径，血清的C3蛋白含量我不太清楚，但关于C3蛋白的自我裂解，生成的C3b本身就容易被血清中酶类灭活，即使黏附到细胞表面，比如人体细胞表面的衰变加速因子（DAF)也会灭活C3Bb，而保护素CD59也能够把几乎成型的膜攻击复合物（MAC）打掉。

deron

另外，对于血清中C3、C5、C6、C7、C8、C9、B、D等蛋白是否配备齐全足以引发旁路途径，也不是很清楚