用石腊做免疫荧光的问题

白衣小彩

请教用石腊作免疫荧光的前辈们脱腊程序。。。我做的总是有自发荧光，脱腊不好，哪位给指点下，多谢啦

jinyiran

1.将 石蜡切片预热2个小时。
( q$ C7 f4 G7 b% T: {; ]2. 准备3瓶二甲苯，标记为二甲苯A，二甲苯B，二甲苯C，依次放入二甲苯A，B，C中，脱蜡10分钟。# Q: s& Q4 k; A! p3 w
3. 梯度酒精复水：100%酒精A，5min,100%酒精B，5min,95%、90%、80%、70%的酒精各5min。1 v: W2 ~  c2 {
4.蒸馏水，3min*3.2 a" i& y/ `( x* ?6 \
5.PBS,3min*3.

白衣小彩

谢谢哈。。。我前面到95%的程序跟楼上一样，没有过80%和70%这也对脱蜡有影响么。感觉脱蜡作用主要在二甲苯

xiongliangxl

酒精的作用是复水，不是脱蜡~
1 B% R. D! p9 Z: u5 p. p貌似自发荧光与你切片的载玻片实用的材料有关系，因为病理科制作石蜡切片为了防止脱片，会使用一些特殊的物质（貌似多聚赖氨酸？具体不清楚），会引起自发荧光。我做了好几次，还没找到解决方法呢~

gqs2872022

你说的自发荧光是哪种光？黄色的吗？ 如果是的话，那是血细胞的自发荧光，
; x9 ]! p# h& k8 q6 r( M6 J* R所以如果要清楚这种荧光，则要求处死动物取材时血要放干净。
& o8 l9 O+ F) B0 _至于脱蜡程序，和楼上几位的差不多，在免疫荧光实验过程中，要求PBS等物质无污染，
8 L/ T0 z$ k& J9 r. v建议抗原修复后再过氧化氢，然后需用血清封闭，每步都需用PBS冲洗干净。/ n$ \6 G" `; J: `" L; w
这样才能减少非特异性染色。所以你说的自发荧光有可能就是非特异性着色造成的。

fendou9

石蜡切片的背景  也就是非特异性着色是个很难克服的问题  除非冰冻 但冰冻组织的完整性没有石蜡的好  这个是个选择的问题了