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wangyimei

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金话筒优秀会员

楼主

发表于 2011-2-28 09:23 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

请问一下大家都是如何来制备MEF-conditioned medium的，若是从原代的MEF开始收集，是连续收集七天的吗，期待解答，谢谢指导！

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优秀会员金话筒

沙发

发表于 2011-2-28 10:01 |只看该作者

将丝裂霉素处理或者射线照射过的MEF接种在培养皿内, 复苏细胞用MEF培养基, 第二天后去除MEF培基, DMEM/F12洗一次,换ES培基, 每天收集上清, 收集天数视MEF状态而定, 一般不超过7天. 收集后-20度冻存备用. 使用时37度解冻, 0.22滤器过滤后使用.
) Q5 T7 J, v! M, M/ [) T
不要使用未处理的MEF, 否则MEF自身不断增殖, 产生的培基上清条件不稳定.