Cell stem cell最新文章：Highly Efficient miRNA-Mediated Reprogramming

xyklmu

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0 E( T  j) d8 t. [+ R3 [# |# c% vCell stem cell Volume 8, Issue 4, Pages Pages 376-388 (8 April 2011)   " Z9 g  s, e& N+ d

# A" t# l- k4 K3 Z4 h( Y0 gHighly Efficient miRNA-Mediated Reprogramming of Mouse and Human Somatic Cells to Pluripotency
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2 t$ l! G9 A/ u9 oFrederick Anokye-Danso, Chinmay M. Trivedi, Denise Juhr, Mudit Gupta, Zheng Cui, Ying Tian, Yuzhen Zhang, Wenli Yang, Peter J. Gruber, Jonathan A. Epstein, Edward E. Morrisey8 V8 n# b/ i/ `9 z4 N% Y3 L2 N9 {+ W. q
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Highlights
( |, K9 C# ]7 Q► miRNAs alone can reprogram somatic cells to pluripotency
7 k8 x( Y, @/ i► The miR302/367 cluster reprograms both mouse and human fibroblasts   ^' n+ ~. _; {% {; g: v+ T4 m
► miR367 is required for miR302/367 reprogramming
) o  X, E" c/ `! K► Low Hdac2 levels are required for miR302/367 reprogramming7 [# a4 x3 a; m) q2 n2 i8 V
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/ ~) b: k' w" o% I现将这篇文献及附件信息贴上，欢迎大家进行讨论。$ u8 e) ^9 {0 o2 E  q7 Y6 Z
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海洋注：本文跟帖中有很多不同意见 本文是否存在作假可能 欢迎大家参与讨论 发表自己的观点
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xyklmu

2010年Science杂志总结出的10大科技进展中，有关细胞重编程的描述：3 }% y( A2 u2 Y
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Souped-Up Cellular Reprogramming! W, j$ H2 Z7 t

( Y2 r4 ^& Z: {/ ~" QChanging a cell’s fate by adding extra copies of a few genes has become routine in labs around the world. The technique,
3 E, d* W  k, g- k  Rknown as cellular reprogramming, allows scientists to turn back a cell’s developmental clock, making adult cells behave9 I6 I/ z/ v. V$ i
like embryonic stem cells (see “Insights of the Decade,” p. 1612). The resulting induced pluripotent stem cells (iPSCs)2 U4 N! M1 z8 X( R2 W( A0 }
are helping scientists to study a variety of diseases and may someday help to treat patients by supplying them with genetically4 S3 F$ k& z7 ~$ I3 H$ H
matched replacement cells.; l& o) E2 s% r- M; Z
This year, scientists found a way to make reprogramming even easier using synthetic RNA molecules. The synthetic RNAs
: U9 n4 _' @8 @; I* R" r; z: vare designed to elude the cell’s antiviral defenses, which usually attack foreign RNA. The technique is twice as fast and 100 times4 Z2 H& c$ O5 X: q, ^2 U; |! \
as efficient as standard techniques. And because the RNA quickly breaks down, the reprogrammed cells are genetically identical3 E+ u% N. b* V
to the source cells, making them potentially safer for use in therapies.
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Early evidence suggests that the RNA approach reprograms the cell more thoroughly than other methods do, yielding a+ U7 d9 |9 h! i6 P" U, v
closer match to embryonic stem cells. The method can also prompt cells to become nonembryonic cell types. By inserting synthetic( ]$ S' P' w8 a$ J
RNA into a cell that codes for a key gene in muscle tissue, for example, the researchers could turn both fi broblasts and iPSCs into muscle cells.) h% q& m" j  }' Z
编者对具有调控的RNA分子在细胞重编程中的作用的预言，这么快就实现了，呵呵，说不定就是文章的作者提前透露出来的消息呢。( f  d2 K8 V; n1 a( p; W: h

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1 E! U6 T) v1 [- s, n这篇文章中利用miRNA302/367 在除去SKOM的情况下直接诱导出iPS，而上个月中科院广州生物院裴端卿组在JBC发表利用miRNA302/367显著提高了iPS效率，两篇文章的区别就在有没有加四因子诱导，最后发出来的文章差别很大，国内科研在创新方面还是不够给力啊！
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附上裴的文章：

xyklmu

1）两篇文章在如何诱导iPS产生的方法方面没有太大的区别，cell stem cell这篇文章用的慢病毒的方法，而裴用的逆转录病毒，后者在感染效率上会略输一筹的。所以前者的作者一直在强调诱导的高效性，两个数量级以上。
9 t5 r9 l& L. Y# j0 z4 ?: a* l2）纵观两篇文章，cell stem cell这篇文章在分析诱导出来的iPS表型marker上做足了功夫，包括including pluripotency marker expression, teratoma formation, and, for mouse cells, chimera contribution and germline contribution.这一点裴的文章似乎有点单薄，他们对MET似乎更情有独钟。
9 P; T& O) X3 J  _, y3）cell stem cell这篇文章还对miRNA302/367发挥作用时的协同因素Hdac的表达水平进行了分析，从调控的网络性方面更深入了一步，裴做的也不错，找到了miRNA302/367的靶标。
6 K/ Y/ I) Y' |1 g2 r: u) X, y  k6 e" Z总体上感觉还是前者的分析比较到位也有深度，我们能够做出来同样的结果，在这一步上可能就有所不及了，个人愚见，呵呵
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snokey

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个人很不看好这篇文章，感觉too good too be ... 希望将来别的组能重复出来。
7 K- }% o# a; F6 U2 ^第一：做miRNA302/367的Lab太多了，用把这几个microRNA组合起来一起转染细胞，或者用载体表达整个microRNA cluster的工作很多人都做过了，我都知道一个很有Credit的（常有Nature level paper）的组做了好一阵了，没有得到什么非常非常明显的结果。
, A6 V; I* k, t( M第二：关于ES-like 克隆的统计，按文章的统计方法来看，他们得到的人的细胞中的诱导效率差不多为10%（如果我没有理解错的话），我除了惊叹还是只能惊叹。
' f$ T, D9 x% a# M: t4 b: J第三：VPA的作用问题，VPA的作用其实很大程度上是HDACi-indepent的，个人觉得作者的工作只能部分解释MEF里VPA的作用。
  M7 Y9 \8 [/ V" P第四：现在最流行的就是virus-free系统，病毒表达miRNA302/367可以work，直接转microRNA进细胞不就是virus-free/OSKM-free了吗？3 l' Q3 D1 j# f
第五：哈佛那篇靠合成mRNA高效诱导iPS的文章其实也有类似的问题（too perfect）。据我所知有公司重复了，结果很不乐观，实际上那篇文章真的很难重复。我个人一直有个很大的疑惑，关于Fibroblast转染的问题。众所周知，Fibroblast很难转，做过的人都知道，即使用优化的Nucleofection程序，转染效率不过50%，哈佛那篇用RNAiMAx（其实是弱化版的Lip2000）居然就可以搞定了？（而且是那么长的cDNA） 那样Lonza最有名的产品Nucleofector早就没有市场了。+ y% E+ h- b" Z7 H

6 H. n& a6 W, `. P/ I  h个人觉得这篇文章值得借鉴的地方是找出了一些VPA可以提高诱导效率的解释。7 P# z5 M* z+ r5 d* t0 i: A( D
时间/重复是最好的判断标准，希望我的观点是错误的。

embryonic12

我们也试过哈佛的那个方案，很难重复，文献就是个文献，科研还得自己做

snokey

楼上的，你打算重复这篇文章吗？

ambassador

有这篇同一期的文献没？
/ k* Y, A3 c) i3 I2 ^9 z6 dDefects in Trophoblast Cell Lineage Account for the Impaired In Vivo Development of Cloned Embryos Generated by Somatic Nuclear Transfer
+ l$ R$ d, g/ d# A9 M- V- ~! qJiangwei Lin1, 2, Linyu Shi1, Man Zhang1, Hui Yang1, Yiren Qin1, Jun Zhang2, Daoqing Gong2, Xuan Zhang1, Dangsheng Li3 and Jinsong : r$ e- [6 c( h

+ e5 l3 m& w, X1 [" V& p4 t: _7 b链接附上：http://www.sciencedirect.com/sci ... e8161f55c5940736b7e- M4 A1 q# T: g7 n
+ e/ M* J) r5 Q# i( I/ B+ U" a
各位朋友：帮忙下载一下！

xyklmu

回复 ambassador 的帖子
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Defects in Trophoblast Cell Lineage Account for the Impaired In Vivo Development of Cloned Embryos Generated by Somatic Nuclear Transfer
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3 l6 @% ]: [$ q1 g' b  r  B下载好了，楼上的可以下载了- F9 `* t7 V$ U! \4 E

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ambassador

xyklmu 发表于 2011-4-9 23:01 ! M% b; ~* o/ T1 p% e
回复 ambassador 的帖子/ L* F2 K7 }8 v8 t% r
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Defects in Trophoblast Cell Lineage Account for the Impaired In Vivo Develop ...

* \! q! {& R% a- q5 h3 I
谢谢啊！虽然同学发给我了。。。