求油红O和茜红素S的配制问题

taoqilh

在做成脂和成骨的诱导分化，订购了油红O和茜红素S，均为SIGMA，但在网上查不到说明书和配制方法，求配制方法

xuchao717

(4) 油红O储存液:. l( y( s% J, J, k
油红O粉末            0.5g) h$ K- W( u, j# [1 |% Y* G+ L9 G2 `
异丙醇               100ml  U- a# d4 k' e/ D  g1 \' w) f
混匀，配成0.5%母液，4℃避光保存。
+ A2 q3 K2 \' J, a0 t(5) 油红O应用液：
: f( M7 K) D% W* }. C临用前取储存液4mL，加6mL PBS 配成工作液，滤纸过滤，静置 10min  后使用。  Z' D8 V3 u6 b# b: x0 u% i8 y' ?5 y
(6) 0.1%茜素红染液：5 d. h" w( ~# E+ u( S
茜素红粉末            0.1g8 r& Y' J( d! u% I% p
PBS缓冲液(pH7.4)      100ml
0 B/ z5 P2 V6 s+ {混匀，滤纸过滤，4℃保存。: o1 l& _3 @9 B7 ?. l" d* O

taoqilh

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7 h# l- Q6 u- A
谢谢，那能再告诉我下染色的步骤方法吗

ljs

0.5g油红O粉末加入到100ml异丙醇中，无法全部溶解，储液在放置的过程中有沉淀在底部，在配置成工作液后过滤。

zerollx

本人只做过油红-O染色，给你介绍下我自己的做法：  Q) Y# T# m3 P: {, e5 V9 U
油红-O染料：
8 s$ @( t0 h! Y, @4 e0 R% O       储液：0.7g油红-O溶解在200ml的异丙醇中，0.2um滤器过滤（除去沉淀），室温储存。+ O* c) S1 m1 k! w4 [; i2 _
      工作液：配成上述浓度60%的浓度，即加30ml储液，20ml蒸馏水，混匀，室温放置30min，若有眼见的沉淀物，可再次过滤，24h内使用。
$ H8 S+ V. A+ o+ F染色：
+ W/ o/ _: C8 J7 L( ]固定：弃去培养基，DPBS洗涤，4%多聚甲醛固定10min（或10%福尔马林1h、或70%乙醇固定1h），弃去固定液，DPBS洗涤（此步后可在4度保存数月）; _9 s7 V7 C; C3 k4 e) y
      染色：六孔板中每孔加2ml油红-O染料，室温孵育20~60min。" @6 D$ O8 d8 q
脱色：用2ml DPBS洗涤直至背景色干净，注意一定要洗干净（不要加太多的DPBS洗涤，否则会将染料浮起得更高将皿壁也染上），有效的洗完之后，加入2ml的DPBS,倒置显微镜下观察。! g+ n5 W# ~, E

" n: l! N9 y" z
3 v" ?" |0 C8 b
/ u# G# ]" I" V& g给你上传个文献，这里面有很多关于脂肪干细胞方面的基础知识，分离、分化、鉴定、机理，好好研读，你将受益良多……

xuchao717

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2 K/ \' X: Q: H" k( [0 k, Q" n+ [# Z9 n. T5 a4 I  c; a
油红O染色1 M  Q/ Y# z* m+ u6 ?
将成脂肪诱导液诱导21d后的盖玻片取出，用PBS洗涤3次，4%多聚甲醛固定30min，PBS洗涤2次，蒸馏水洗涤1次，60%异丙醇1min，将玻片浸入过滤后的油红O染色液中，封口膜密封，避光染色30min，再用60%异丙醇分色至背景清晰，蒸馏水轻轻冲洗，中性树脂封片，摄相记录。1 J$ g+ v7 N6 `
茜素红染色: g2 K% I. w+ X" L* l1 Q
将取出的盖玻片用PBS冲洗2次后，用95%乙醇固定10min，0.1%茜素红37℃染色30min，弃去染料，蒸馏水充分冲洗，中性树脂封片。倒置显微镜下观察并摄相记录。
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