如何去除ESs中的feeder layer cells？

jn808

在制备拟胚体（EBs）时，ESs中混有的feeder layer cells会影响EBs的质量，敢问专家有什么好的方法去除ESs中的feeder layer cells呢？这个问题困扰很久了一直很难有效解决，特此咨询！

jhu132llh

怎么去都会有可能残留的7 n$ A: {9 m# A1 M
还是只用无饲养层得培养条件最好

chenks

我们一般都用差速贴壁的方法,利用Feeder和ES细胞贴壁速度不同,分离它们.具体方法是:消化细胞后,种在事先包被Gelatin的培养皿上,半小时后,小心吸取上清就行了.

流浪的波斯猫

恩 同意楼上的说法 只是最后吸取的含有胚胎干细胞的上清最好接种在国产皿里 这样容易悬浮形成拟胚体，饲养层细胞会继续贴壁，这样可以在第二或第三天的时候继续换个新的国产皿 尽量进行纯化

sapery279

如果差速贴壁一次的细胞仍达不到要求，可以将差速一次后的上清吸走，再差一次。或者是无feeder养，直接消化了用。

jn808

感谢大家的建议，这些方法我也试过。缺失很难完全去除feeder。希望会有更好的去除feeder方法。无feeder layer 确实很好，但是成本好高啊

jn808

回复 sapery279 的帖子& J1 z- f( o/ O
+ s+ E" E3 c5 `# a% z9 U
感谢大家的建议，这些方法我也试过。缺失很难完全去除feeder。希望会有更好的去除feeder方法。无feeder layer 确实很好，但是成本好高啊

starlight

我们也是用差速贴壁法，

amberma

差速贴壁  贴两次明胶  基本上就能除掉

yangpan521

胰酶消化后接种在国产皿里，细胞基本都呈现悬浮生长，有饲养层的会继续贴壁，贴壁时会带着部分的ES细胞，几个小时后换液，将所有的培养液都吸入离心管内，自然沉降5分钟后，将上面的悬液再放入皿里，重复几次，饲养层基本上都换掉了