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我本人养细胞养了已经有5年经历了，最近1年有幸（还是被麻烦呀？）管理实验室的细胞室。很多人养了3年细胞，愣是没养好细胞，结果混混沌沌的就硕士毕业了。总有人问我怎么才能养好细胞。其实细胞培养没什么技巧，就是要心静，不能着急，养成良好的无菌习惯和实验习惯是必须的，做完实验要清理自己制造的垃圾。我想每个人都不想自己在准备做细胞实验之前，超净台就已经是凌乱不堪的吧？在分享我的经验之前，我先跟大家讲一个小小的背景，我在真正动手养细胞之前，光用眼睛看师姐师兄养细胞就看了半年！就是在细胞室准备棉球等杂事之类的。没错，很枯燥，很无聊，但这是一个类似思想训练的过程。经过这个过程，我明白细胞的生长真不容易，得潜心下来照顾它们吃好喝好睡好，它们可是宝啊！0 |' s2 D1 G0 `9 m, q
下面我把我们在细胞室的操作要求分享一下。
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2 j0 B' H6 \5 O1.每天应该对细胞实验室至少进行每天3次，每次半小时的紫外照射灭菌。紫外辐射对人体有害，灭菌时，人员不能进入细胞实验室。
5 ?/ d, B( Q0 G1 x9 X1 Q2.进入细胞实验室操作的人员，应该身着无菌服，长发者戴帽子，更换消毒过的拖鞋，操作有毒试剂要带好手套。外来带入的物品，都要经过紫外照射或者酒精擦拭的表面灭菌（这个是必须的！）。
4 F- t2 S8 W. K# V9 Q3.裸手进行细胞操作，则要在操作之前用消毒液洗手，并在将手伸进超净台前用酒精擦拭全部手部皮肤。带橡胶手套进行细胞操作，在将手伸进超净台前也要用酒精擦拭手套的整个外表面。NOTE:禁止佩戴手饰进入！ : N* E& _. Q1 V! A4 X$ \
4.试剂要按储存要求保存，在超净台内打开过一次的试剂，储存前要用封口膜封住瓶口，并最好在封口膜上表明打开日期。 % k4 U9 _+ W# A% T
5.超净台灭菌以后，任何拿进超净台的物品都要用酒精擦拭物体的全部表面，然后在酒精未干之前放进超净台。要使用到的细胞培养耗材可以在超净台灭菌前放入其中，跟超净台一起灭菌。而细胞培养要使用到的试剂则不可以放入超净台接受紫外照射。
' o0 O. B9 g' }, ~6.细胞实验要使用到的直接接触细胞的试剂，一般要在37度水浴锅中预热半小时，使其温度接近37度。消化的胰酶最好先预热。 9 O6 h2 J8 G9 ]' N/ t% u E+ |2 b0 k
7.细胞离开培养箱被进行操作的过程不宜过长，否则由于外界温度和二氧化碳浓度的不适，会导致细胞状态不好甚至死亡。
" i$ T. b5 ^3 t2 H8.细胞培养用的器皿，包括培养瓶、培养皿等等，要对着酒精灯的火焰打开开口，操作过程开口都要对着酒精灯火焰10cm范围内。细胞培养使用的试剂，在酒精擦拭试剂储存器皿后带入超净台。打开瓶盖之前要再用酒精棉花擦拭瓶口，然后对准酒精灯火焰打开开口。操作过程整个开口都要对着酒精灯火焰10cm范围内。 8 q r' q0 _6 @- H5 D
9.操作过程最重要的原则是保持细胞和试剂无菌，并且避免细胞和试剂之间、试剂和试剂之间的交叉污染。比如已经将移液管伸入细胞瓶里吹打细胞，那么要再吸取新的培养液加到培养瓶中则不能再使用该移液管，一定要更换新移液管再去吸取新的培养液。尽量减少细胞和培养液暴露的时间。- E5 j. w( E+ S) |. W Y/ d- E
10.细胞孵箱不能反复打开，而且应尽量快开快关，否则温度、湿度、CO2浓度都达不到要求，细胞能长好才怪？尤其注意的是湿度，一定要大于80%以上！小贴士：经常给孵箱加水。 |
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发表于 2012-3-5 17:48
发表于 2012-3-5 19:15
整体上还是挺不错的，顶一下。