请教小鼠原代脂肪干细胞的形态及分离培养条件

avbn

最近做的小鼠脂肪干细胞的分离 培养都不成功，请教高手有关的分离培养方法及条件。

franty

偶用的是大鼠的腹股沟脂肪做脂肪干，采用I 型胶原酶消化法，将取下的脂肪组织剪碎、消化、过滤、离心，接种到培养瓶就可以了。个人认为细胞还是挺好长的，只要注意无菌操作避免污染就可以。细胞的形态一般是短梭形。

regene

我同楼上的做法一样，后来是从附睾处脂肪垫取，那里的脂肪较纯。

avbn

感谢回复，请问消化要多长时间，培养基用的什么，能不能分享下相关的文献，多谢！

细胞海洋

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你询问谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
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avbn

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好的，谢谢斑竹指点

your1024

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8 H% r* m$ f3 n; ~! k9 x  HⅠ型胶原酶消化的话，37℃摇床大概40min到1h的样子都可以，酶不要加过多，大概1~1.5ml就可以了，主要就看未能剪碎的大组织块已经消失，消化液呈类似糊状就可以了。培养基我们用的是α-MEM。文献还有protocol在这个版里都可以找的到，都看一看，版里帖子不算很多。

avbn

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9 Q- ^' O' b5 F1 S7 h多谢，请问多少量的脂肪组织加1~1.5mL消化液，分离后第一次换液是什么时候，接种密度大概是多少？

your1024

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你做的是小鼠？正常的话腹股沟取材之后（如果不够我们还会取些背部肩胛骨处的。还有人直接就取肠系膜上的脂肪，不够我没做过），就加那么多，具体怎样的量我也形容不出来，不好意思。不过我觉得可以视情况而定，少了你可以多加点，多了你可以少加点，这些都不是绝对的嘛！分离后的第一次换液我听过两种说法，一种是第二天就换液，理由是24h之内，该贴壁的就已经贴壁了，不贴壁的也就没办法贴壁了，也就可以换液了。第二种说法是我们在使用的，就是取原代之后3~4天内不去动它，之后再去换液，理由是怕影响贴壁效果，这种做法效果还可以，能养起来的话状态等也都不错。因为最近一直都没有取过脂肪，所以没有做过两种方法的对比，这个还需要高手们来指教这个问题。

your1024

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" O, v9 ~9 R/ P接种的密度的话我都没有计算过，取一只老鼠我可以都放在一个T25的瓶里，也可以分两个接种，都是能够长出来的。