DMSO对胚胎干细胞的影响

随风的天使

请教各位大侠，DMSO对胚胎干细胞的分化有影响没？我冷冻后的胚胎干细胞好像就不能生成类胚胎了。是分化了吗？

懵懂干细胞

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" a  {& ^0 d( n0 V. T你详细讲一下你的冻存条件吧？是10%的吗？% }& d, C  ~3 X  L
而且这个原因好像不太可能，反过来思考一下，如果DMSO对会使胚胎干细胞不能形成胚体的话，那ES细胞岂不是不能冻存？

cochongg

不会吧，我们一直在做这个，如果按你说的Dmso影响干细胞，导致其不能形成类胚胎，那么冻存前后的细胞必定发生了一系列的变化。+ ]$ a  [5 X7 a" Z. a

* A( ~: _" H9 v. H: a6 O然而实际上我们实验室多年的实验经验告诉我，这是不可能的。5 u8 L8 i/ W& D& `0 U) a
0 V* u. J8 q; w7 ]- S6 d
首先你要知道DMSO添加的目的是：充当保护剂，让细胞度过冰点，防止细胞的冻融过程死亡（主要原因渗透压的改变）
) N" U. r% j; k4 i其次DMSo确实对细胞有毒害作用，但是，但是要一定浓度一定作用时间。8 _5 e2 g, @1 M$ R4 W# u- j3 ]& o
冻存液中DMSo浓度8-12.5%均为安全的，具体浓度选择要看的你细胞类型以及你的冻存方法。
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cochongg

补充一下：你要做类胚胎时，不能用刚复苏的ES，这样不是太好，但是应该也可以做出来。
4 D- @% ^( z, \) Z' r! G# S5 J3 T6 f& j不过建议你ES复苏后传上一两代，镜检状态ok健康的细胞再用来做EB0 z$ {" i( _& G8 o7 m# B

chentian820

建议你把细胞传两代后再做

cortex

做不出来EB，估计是你ES状态的原因。DMSO不会影响。你可以挑选ES致密的试试看。当然复苏细胞传一两代再做最好了。

BNJN

复苏ES后可以用培养液先洗洗，去除DMSO。

二月水

BNJN 发表于 2012-5-8 15:38 6 l! w/ @( K% B  p3 h" y! ]
复苏ES后可以用培养液先洗洗，去除DMSO。

7 t; h0 S1 Z8 ~0 K怎么洗？需要离心么？转速？时间？

BNJN

比如1ml的细胞，加9ml预热的培液，轻轻混匀，再离心（我实验室，H：1.1K，1min；M：2.5K，2min），最后用培液重悬加到MEF上